Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..

BADANIA SEROLOGICZNE
Dodatkowe materiały i odczynniki potrzebne do testu
probówkowego ASO
Woda destylowana
Pipety (1 ml, 2 ml)
Probówki
Łaźnia wodna
Test probówkowy ASO
1. Rozpuścić zredukowany antygen streptolizyny O (suchy preparat) w odpowiedniej
objętości wody destylowanej (w opisanej butelce), przygotowując
roztwór o stężeniu 2 IU w 1 ml. Roztwór nie zawiera konserwantów i musi
zostać wykorzystany w ciągu 6 godzin.
2. Rozpuścić standardową antystreptolizynę O (suchy preparat, 20 IU/butelka)
w 10 ml buforu streptolizyny O. Roztwór można przechowywać przez
6 miesięcy w 4°C, pod warunkiem, że nie uległ kontaminacji.
3. Przed użyciem rozcieńczyć bufor streptolizyny O (25 × koncentrat) w 480 ml
wody destylowanej. Rozcieńczony bufor nie wykorzystany w ciągu tygodnia
należy wyrzucić.
4. 1 ml erytrocytów baranich wypłukać trzykrotnie w buforze streptolizyny
O i odwirować, zebrać pipetą supernatant. Dodając buforu streptolizyny O
uzyskać 8% zawiesinę komórek.
5. Odczynniki i surowicę pozostawić do ogrzania do temperatury pokojowej.
6. Przygotować w probówce rozcieńczenie surowicy pacjenta 1:10 (0,1 ml
surowicy + 0,9 ml buforu streptolizyny O). Przygotować dwa wyjściowe
roztwory z rozcieńczenia 1:10 w poniżej przedstawiony sposób:
Surowica Bufor Rozcieńczenie
0,2 ml (1:10) 1,8 ml 1:100
1,0 ml (1:100) 0,5 ml 1:150
7. Przygotować następujące serie rozcieńczeń buforu streptolizyny O dla
każdego z wyjściowych roztworów:
Probówka Surowica Bufor Rozcieńczenie
Zredukowana
streptolizyna O
1 0,2 ml (1:10) 0,8 ml 1:50 0,5 ml
2 0,5 ml (1:100) 0,5 ml 1:200 0,5 ml
3 0,5 ml (1:200) 0,5 ml 1:400 0,5 ml
4 0,5 ml (1:400) 0,5 ml 1:800 0,5 ml
5 0,5 ml (1:150) 0,5 ml 1:300 0,5 ml
6 0,5 ml (1:300) 0,5 ml 1:600 0,5 ml
7 0 1,5 ml — 0
8 0 1,0 ml — 0,5 ml
8. Uporządkować probówki według wzrastających rozcieńczeń: 1:50, 1:200,
1:300, 1:400, 1:600, 1:800.
9. Do probówki kontrolnej 7. dodać 1,5 ml buforu, do probówki kontrolnej 8.
dodać 1 ml buforu.
10. Do wszystkich probówek, z wyjątkiem kontrolnej 7., dodać 0,5 ml roztworu
zredukowanej streptolizyny O.
154