Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..

BADANIA SEROLOGICZNE
Do wykrywania antygenów służą cztery różne testy:
• W teście aglutynacji szkiełkowej antygen opłaszczony jest na cząsteczkach
lateksu lub swoiste przeciwciała związane są na komórkach gronkowców.
Reagenty miesza się ręcznie ciągłym ruchem kolistym przez 1 – 2 minuty
i makroskopowo obserwuje reakcję aglutynacji.
• W testach ELISA roztwór próbki i antygenu najpierw przepuszczany jest przez
błonę opłaszczoną przeciwciałami (zwykle monoklonalnymi). Następnie błonę
umieszcza się w roztworze zawierającym kolejne (monoklonalne) przeciwciała
związane z enzymem. Obecność kompleksu antygen-przeciwciało z enzymem
wykrywa się w reakcji z barwnym substratem dodanym do roztworu.
• W ,,złotym’’ teście immunologicznym roztwór próbki i antygenu dyfunduje na
błonie, którą następnie się ogląda.
• W optycznym teście immunologicznym, przeciwciała związane są z silikonową
płytką o odblaskowych właściwościach. Reakcja antygenu ze specyficznym
przeciwciałem powoduje zmianę w warstwie powierzchownej płytki i widoczną
różnicę refleksu światła.
Procedury odczynów aglutynacji lateksowej
i koaglutynacji
1. Dla zwia˛zanych antygenów komórkowych: używając standardowej ezy przenieść
czyste kolonie do kropli soli na szkiełku, uważnie wymieszać do
uzyskania lekko opalizującej zawiesiny. Obecność aglutynacji zwykle wskazuje
na szczepy szorstkie (R — ang. rough); szczepy gładkie (S — ang.
smooth) nie wykazują aglutynacji w soli. W takim przypadku należy dodać
odczynniki i przejść do punktu 4.
Dla ekstrahowanych antygenów: używając standardowej ezy przenieść dobrze
izolowane kolonie do probówki zawierającej roztwór ekstraktu, uzyskać
zawiesinę. Inkubować zawiesinę w35°C lub zgodnie z zaleceniami producenta.
Dla próbek klinicznych (płyn mózgowo-rdzeniowy, mocz): podgrzać próbkę do
temperatury wrzenia lub według zaleceń producenta. Schłodzić i odwirować
w 2000 g przez 5 – 10 minut.
2. Umieścić na płytce 1 kroplę nośników opłaszczonych przeciwciałami.
3. Umieścić obok 1 kroplę zawiesiny antygenu.
4. Wymieszać 2 krople i rozprowadzić w kratce.
5. Przechylać szkiełko ręcznie, wykonując ciągłe okrężne ruchy przez 1 minutę.
Uważać, aby mieszanina nie rozlała się poza granicę kratki.
6. Po określonym przez producenta czasie obejrzeć szkiełko i sprawdzić, czy
obecna jest aglutynacja. Dla uzyskania lepszej widoczności trzymać szkiełko
blisko źródła światła i oglądać na ciemnym tle.
7. Jako wynik dodatni uznaje się obecność aglutynacji w mieszaninie antygenu
i przeciwciał, np. zawiesina wykazuje aglutynację lub grudki. Aglutynacja jest
najlepiej widoczna przy delikatnym przechylaniu szkiełka, tak aby płyn
spływał wzdłuż dolnej granicy kratki.
156