Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..

KAŁ
antygenów możliwa jest jedynie w obecności bakteriofaga i może stanowić jedyną
różnicę między niektórymi serotypami.
Gatunki Salmonella podzielono na grupy na podstawie obecności określonych
antygenów O. Wspomniany podział jest także określany jako schemat Kauffmanna-White’a.
Duże litery rzymskie określają grupy O. W oryginalnym schemacie
grupy oznaczone były literami A, B, C, D i E; stopniowo poszerzono zakres grup
od A do Z, z czterema podgrupami C, trzema D, czterema E i dwiema G. Grupy
O określane są na podstawie obecności następujących antygenów O:
Grupa: A B a C 1 C 2 D E 1 F
Antygen: 2 4;5 6;7 6;8 9 3;10 11
Istnieją inne różnice w strukturze antygenowej: zmiana w wyglądzie kolonii
od gładkich do szorstkich w zależności od obecności lub braku antygenu
Vi. Obecność antygenu Vi hamuje aglutynację w swoistej surowicy anty-O.
Antygen Vi jest zwykle wykrywany w świeżo izolowanych szczepach i szybko
tracony podczas ich przechowywania. Antygen ten jest ważny w identyfikacji
szczepów S. typhi, często nie ulegających aglutynacji w heterogennej surowicy
anty-H.
Procedura identyfikacji antygenu somatycznego O
Bezpośredni test aglutynacji szkiełkowej
1. Przed rozpoczęciem badania umieścić roztwór soli i odczynniki w temperaturze
pokojowej.
2. Umieścić kroplę roztworu soli na czystym szkiełku mikroskopowym.
3. Za pomocą sterylnej ezy pobrać niewielką ilość materiału z hodowli na skosie
agarowym i rozprowadzić w kropli soli uzyskując jednolitą, mętną zawiesinę.
4. Pod lupą lub pod mikroskopem w niewielkim powiększeniu (× 10) obejrzeć
zawiesinę bakterii, aby wykluczyć autoaglutynację zawiesiny w soli.
5. Pobrać ezą 10 µl poliwalentnej surowicy odpornościowej O Salmonella (A-I
i Vi) i umieścić ją na szkiełku tuż obok zawiesiny bakterii.
6. Wymieszać surowicę z zawiesiną bakterii i przechylać szkiełko do przodu i do
tyłu przez 1 minutę. Obserwować tworzenie się grudek oglądając szkiełko
w dobrym świetle. Pojawienie się w tym czasie wyraźnych grudek jest
wynikiem dodatnim.
7. Jeśli wynik jest dodatni, powtórzyć badanie z monowalentną surowicą
odpornościową.
Niektóre pałeczki Salmonella mają antygen powierzchniowy Vi i żywe lub
nieinaktywowane termicznie nie ulegają aglutynacji z surowicą odpornościową
grupy C1 (O:6,7) lub grupy D (O:9). Aby zapobiec otrzymaniu nieprawidłowego
wyniku, w celu usunięcia antygenu Vi, zawiesinę należy podgrzać w gotującej
się wodzie, schłodzić, oddzielić bakterie przez wirowanie, ponownie
zawiesić wświeżym fizjologicznym roztworze soli i przeprowadzić test z tą
samą surowicą.
a
Wszystkie szczepy Salmonella podgrupy B zawierają antygen 4, tylko niektóre antygen 5.
68