Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..

CZE˛ŚĆ I
Najlepiej, jeśli próbki w kierunku obecności N. gonorrhoeae posiewane są na
podłoże hodowlane bezpośrednio po pobraniu. Posiane płytki należy umieścić
w eksykatorze lub w atmosferze zawierającej 5 – 10% dwutlenku węgla, o wysokiej
wilgotności. Jeśli natychmiastowy posiew i inkubacja są niemożliwe, należy
użyć podłoża transportowego, takiego jak Amies lub Stuart. Czas transportu
powinien być możliwie najkrótszy, maksymalnie do 12 godzin, w temperaturze
otoczenia do 30°C. Należy unikać schłodzenia.
Badanie bezpośrednie i interpretacja
W większości badań wykazano, że obecność czterech lub więcej wielojądrzastych
(PMN) leukocytów w polu widzenia w immersji olejowej zdecydowanie wskazuje
na zapalenie cewki moczowej u mężczyzn. Opisane kryterium jest szczególnie
użyteczne dla lekarza, który musi podjąć decyzję o rozpoczęciu leczenia pacjenta
ze słabo nasilonymi objawami.
W większości przypadków rzeżączki u kobiet wydzielina jest ropna, a w rozmazie
z cewki moczowej widoczne są liczne wielojądrzaste leukocyty (> 10 w polu
widzenia w immersji olejowej). Jakkolwiek nie zawsze jest tak w przypadku
NGU, które daje mniej nasiloną reakcję zapalną. Rozmazy z więcej niż 4 PMN
leukocytami w polu widzenia i bez wewnątrzkomórkowych Gram-ujemnych
dwoinek wskazują na NGU.
Cienką warstwę materiału należy nanieść wymazówką na szkiełko podstawowe,
preparat utrwalić temperaturą i wybarwić błękitem metylenowym lub metodą
Grama. Obecność Gram-ujemnych wewnątrzkomórkowych dwoinek w wielojądrzastych
leukocytach w preparacie bezpośrednim z cewki moczowej wskazuje na
rzeżączkę.
Nie zaleca się wykonywania barwionych metodą Grama preparatów z próbek
pobranych z cewki moczowej u kobiet bez objawów zakażenia, ze ślepych
wymazów odbytniczych lub z próbek z jamy ustnej. Jednakże badanie mikroskopowe
ropnego materiału otrzymanego w anoskopii ma wysoką wartość
diagnostyczną.
Hodowla Neisseria gonorrhoeae
Posiane płytki z modyfikowanym podłożem agarowym Thayer-Martina (MTM) 1
(lub agarem New York City (NYC)) 2 należy inkubować w35°C w wilgotnej
1
Modyfikowany agar Thayer-Martina przygotowuje się przez dodanie w 50°C mieszaniny antybiotyków
i IsoVitaleX lub równoważnego suplementu do agaru czekoladowego przygotowanego
z agaru GC lub agaru Columbia, stanowiącego podstawowe podłoże. Komercyjnie dostępna z wielu
źródeł jest mieszanina zawierająca 3 lub 4 antybiotyki; mieszanina VCN zawiera wankomycynę,
kolistynę i nystatynę: VCNT zawiera również trimetoprim.
Końcowe stężenie antybiotyków w przygotowanym podłożu:
– wankomycyna: 3 µg/ml – nystatyna: 12,5 IU/ml
– kolistyna: 7,5 µg/ml – mleczan trimetoprimu: 5 µg/ml
2
Modyfikowane podłoże New York City przygotowuje się przez dodanie do 500 ml bazowego
sterylnego agaru GC schłodzonego do 50°C następujących dodatków:
– 50 ml krwi końskiej lizowanej przez dodanie 5 ml/l saponiny,
– sterylny autolizat drożdżowy,
– zestaw antybiotyków zawierający: wankomycynę, kolistynę, amfoterycynę i trimetoprim.
Składniki dostępne są komercyjnie z Oxoid Ltd. Wade Rd, Basingstoke, Hants RG24 8PW, England.
91