Podstawowe procedury laboratoryjne w ... - digicollection.or..

PODSTAWOWE PROCEDURY LABORATORYJNE W BAKTERIOLOGII KLINICZNEJ
Szczepy te można uzyskać z następujących źródeł:
– prawidłowo zidentyfikowane izolaty z próbek klinicznych;
– oficjalne kolekcje szczepów;
– komercyjni producenci;
– referencyjne laboratoria;
– inne źródła z zewnętrzną kontrolą jakości.
Przechowywanie szczepów
Długoterminowe przechowywanie szczepów
Metody długoterminowego przechowywania szczepów pozwalają na kilkumiesięczne
lub nawet kilkuletnie przerwy między przesiewami. Najlepszymi
metodami są: liofilizacja (suchy lód), przechowywanie w zamrażarce lub
w ciekłym azocie, w temperaturze –70°C lub niższej. Metody alternatywne
opisano poniżej.
Glicerol w temperaturze –20°C
1. Wzrost czystych hodowli na odpowiednim stałym podłożu.
2. Wyrosłe kolonie zebrać ezą.
3. Zawiesić niewielką ilość materiału w sterylnym neutralnym glicerolu.
4. Umieścić 1 – 2 ml porcje w zakręcanych pojemnikach lub w fiolkach.
5. Przechowywać w temperaturze –20°C. Unikać powtarzania zamrożeń i rozmrożeń.
Przesiewać co 12 – 18 miesięcy.
Olej mineralny w temperaturze pokojowej 1
1. Przygotować probówki ze skosem agarowym zawierającym wyciąg z serca.
Dla wymagających mikroorganizmów dodać świeżą lub ogrzaną krew.
2. Wysterylizować olej mineralny (liquid petrolatum) w suchym gorącym
powietrzu (170°C przez godzinę).
3. Posiać szczep na skosy agarowe.
4. Jeśli widoczny jest wzrost hodowli, dodać sterylny olej mineralny na wysokość
około 1 cm ponad poziom agaru.
5. Konieczne przesiewy uzyskuje się przez zebranie hodowli spod warstwy oleju.
6. Przechowywać w temperaturze pokojowej. Przesiewać co 6 – 12 miesięcy.
Przechowywanie hodowli w temperaturze pokojowej (stosowane tylko dla
niewymagających bakterii, takich jak gronkowce i Enterobacteriaceae)
1. Przygotować probówki z wysokim słupkiem agaru, bez węglowodanu.
Zalecany jest agar tryptozowo-sojowy (trawiony kazeiną agar sojowy).
2. Posiać szczepy wkłuwając je w agar.
3. Inkubować przez noc w temperaturze 35°C.
4. Zamknąć probówkę zakrętką lub korkiem. W celu uszczelnienia zanurzyć
zakrętkę lub korek w płynnej parafinie.
5. Przechowywać w temperaturze pokojowej. Przesiewać raz w roku.
1
Morton H.E., Pulaski E.J.: The preservation of bacterial cultures. Journal of Bacteriology, 1938,
38: 163 – 183.
25