Immunhistologische Charakterisierung primärer Neoplasien des ...

Anhang
9.3.2 DAB-Gebrauchslösung
Stammlösung:
100 mg 3,3´- Diaminobenzidin-Tetrahydrochloriddihydrat (Fa. Fluka) in 50 ml PBS
lösen;
Lagerung bei -20ºC, vor Gebrauch im Dunkeln auftauen.
Gebrauchslösung:
50 ml Stammlösung in 150 ml PBS lösen und filtrieren. Zugabe von 2 ml 3%igem
H 2 O 2 .
9.4 Verfahren zur Antigen-Maskierung bei der Immunhistologie
9.4.1 Pronase E
0,1 g Pronase E (4.000.000 PU/g) (Fa. Merck) und
0,2 g CaCl 2 X 2H 2 O (Fa. Merck) in 200 ml vorgewärmter PBS auflösen;
mit 1 N NaOH auf pH 7,4 einstellen;
20 Minuten bei 37ºC im Wasserbad inkubieren
9.4.2 Tween 20
0,5 ml 0,25%iges Tween (Fa. Sigma, München) in 200 ml PBS bei Raumtemperatur
auflösen;
20 Minuten auf dem Magnetrührer inkubieren
9.4.3 Triton X-100
0,5 ml 0,25%iges Triton X-100 (Fa. Serva, Heidelberg) in 200 ml PBS bei Raumtemperatur
auflösen;
30 Minuten auf dem Magnetrührer inkubieren
9.4.4 Mikrowellenbehandlung mit Citratpuffer
2,1 g Citronensäure-Monohydrat (Fa. Merck) in 1000 ml Aqua dest. auflösen;
mit 1 N NaOH auf pH 6 einstellen;
Inkubation in der Mikrowelle bei 700 Watt für 20 Minuten;
danach 10 Minuten abkühlen lassen;
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