Immunhistologische Charakterisierung primärer Neoplasien des ...

Material und Methoden
Abb. 3.10: H.E.-Schnitt eines Multiblocks, blaue Pfeile markieren die Orientierungsstanze,
gelber Pfeil markiert die Position 1, roter Pfeil die
Position 60
3.7 Immunhistologie
Bei allen in der Studie verwendeten Antikörpern wurde zur immunhistologischen
Phänotypisierung der Tumoren die Avidin-Biotin-Peroxidase-Komplex-Methode
(ABC-Methode) als Detektionssystem eingesetzt. Dabei wurden biotinilierte, speziesspezifische
Sekundärantikörper verwendet. Die immunhistologische Färbung
wurde mit 15 kommerziell erhältlichen, monoklonalen und polyklonalen Antikörpern
durchgeführt (Tab. 3.1).
3.7.1 Antikörper und Seren
Primär- und Sekundärantikörper wurden in Phospat-gepufferter Kochsalzlösung
(PBS, Herstellung siehe Anhang 9.3.1) mit 1%igem bovinem Serumalbumin verdünnt.
Zur Verdünnung der Komponenten des Detektionssystems wurde nur PBS
verwendet.
3.7.1.1 Blocking-Seren
Zum Blockieren unspezifischer Bindungsstellen im Gewebe wurde je nach Antikörper
Ziegen-Normalserum (ZS) oder Pferde-Normalserum (PS) (siehe Tab. 3.2) eingesetzt.
Die Seren stammen von in der Klink für kleine Klauentiere und Klinik für Pferde
der Tierärztlichen Hochschule Hannover eingestellten gesunden Tieren. Nach mehrstündigem
Stehen des Blutes wurden sie durch Zentrifugation für 10 Minuten bei 370
x g (Minifuge RF; Fa. Kendro Laboratory Products, Langenselbold) gewonnen. Durch
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