Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
ein solcher Bindungsbruch auftritt, desto wahrscheinlicher ist es, dass sich ein Metallkation
aus der NTA – Funktion löst und in der Ankergruppe des Enzyms verbleibt.
In Abbildung 53 sind drei verschiedene Konzentrationen abgebildet, die untersucht wurden.
Neben der Änderung der maximalen Bedeckungen ist auch eine zeitliche Verschiebung
der Gleichgewichte zu sehen. Bei der ersten Messung mit der geringsten Konzentration von
25 nM stellt sich das Gleichgewicht quasi sofort ein. Das Signal springt nach der Injektion
nach oben und fällt dann leichten ab. In der Dissoziationsphase, sobald der Puffer gewechselt
wurde, kommt es erneut zu einem Sprung. Das Signal stabilisiert sich bei einer Winkeländerung
von 24.4 m°. Die zweite Messung mit einer Konzentration von 250 nM an 4 his FNR –
Enzym steigt auf 142 m° an und die Einstellung des Gleichgewichts erfolgt erst nach ca. 11
Minuten. Bei der letzten Messung mit der höchsten Konzentration von 500 nM wird ein Maximalwert
von 237 m° erreicht. Um auf diesen Wert zu kommen, benötigt das System ca. 24
Minuten. Allen drei Messungen ist gemein, dass sie noch einen kleinen Sprung zu höheren
Werten machen, wenn von dem Assoziationspuffer zurück auf den Dissoziationspuffer gewechselt
wird. Dabei kann festgehalten werden, dass dies gegenläufig zur Konzentration des
Enzyms ist. Das zweite Gleichgewicht, in der Dissoziationsphase, stellt sich analog zu den
ersten Gleichgewichten auch mit zunehmender Konzentration später ein und konvergiert gegen
einen Grenzwert, der konstant bleibt. Bei 25 nM ergibt sich ein Grenzwert von 24.4 m°,
was für eine sehr geringe Anlagerung an spricht. Bei der zehnfachen Konzentration wird ein
Grenzwert von 120.0 m°. Dies entspricht fast dem zehnfachen an angelagertem Enzym und
gibt einen guten Trend wider. Wird die Konzentration verdoppelt stellt sich aber das Gleichgewicht
nicht im doppelten Wert ein, sondern bei 153.9 m°, was zeigt, dass der Trend lediglich
bei kleinen Konzentrationen auftritt, sich aber nicht unendlich fortsetzt. Wahrscheinlich
verhält es sich, wie bei vielen anderen Techniken auch 16 , dass die Signale bei kleinen Konzentrationen
linear ansteigen, dann aber in eine Sättigung laufen. Das ist dadurch zu erklären,
dass die Anzahl der möglichen Plätze durch die Anzahl der Ni 2+ – Kationen in den NTA –
Funktionen limitiert ist.
16 Vergleiche UV/vis – Spektroskopie und weitere Spektroskopiearten
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