Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
Abbildung 31: links zeigt die Messungen der 4 – his FNR; rechts zeigt die Messungen der 2 – his FNR. Alle Messungen
wurden in 0.5 M PB, pH 7.5, durchgeführt.
Wird zuerst die Form betrachtet, so fällt direkt auf, dass es keine vollständige
Dissoziation der Enzyme gibt. Beide Kurven konvergieren gegen einen Grenzwert, der auf
der "dynamic response" – Skala ungefähr bei 65 liegt. Als nächstes erkennt man, wie auch
schon vorher zu sehen war, dass das Desorptionsverhalten der 2 – his FNR deutlich schneller
ist und sich eine Stufe ausbildet (kink). Nachdem fast alles Material desorbiert ist, steigt der
Wert nur noch langsam an. Zur mathematischen Beschreibung wird auf eine doppelt
exponentielle Form zurückgegriffen. Ein Grund dafür könnte das Vorliegen zweier
unabhängiger Prozesse an der Oberfläche sein, wie dem Desorbieren des Enzyms und dem
Herauslösen des Metalls von dem tris-NTA Linker. Die genaue Zuordnung dieser Prozesse ist
anahnd dieses Experiments nicht möglich, weshalb auch keine weiteren spekulationen dazu
unternommen werden. Die τ off Werte sind zum einen τ off 1 = 59 s ± 7 s und τ off 2 = 632 s ± 48 s.
Verglichen mit dem τ off des 4-his Enzyms mit 4672 s ±26 s, sieht man eine deutlich höhere
Affinität des 4-his Enzyms. Zur Unterstützung werden zum Schluss noch die K D – Werte der
beiden FNR miteinander verglichen. Im 4 his Fall erhält man einen Wert von 0.35 nM, was
um ein vielfaches niedriger ist als im anderen Fall mit 14.42 nM.
Somit ist auch durch dieses Experiment abgesichert, dass das 4-his Enzym deutlich stärker
an Ni 2+ - modifizierte Oberflächen bindet als das 2-his Enzym.
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