Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
400
350
300
i [nA]
250
200
150
100
∆
50
0
0,0 0,2 0,4
E [V vs Ag/AgCl]
0,0 0,2 0,4
Abbildung 12: Messung zur Bestimmung des k 3 – Wertes mit Hintergrundkorrektur.
Beispielhafte Messung bei 7.5 mV/s mit (rot) und ohne (schwarz) Mediator (25 µM) in 0.1 M PB, pH 7.5, 0.5 µM
4-his FNR und 5 mM NADPH. Blau ist der katalytische Strom der sich aus der Differenz der beiden gemessenen
Ströme ergibt.
Zweck des Designs der Experimente und dieser Messungen ist es die Übertragung der
Elektronen von dem Enzym auf den Mediator zu messen. Dafür ist es wichtig verschiedene
Spannungsvorschubgeschwindigkeiten zu messen, die einen Bereich überdecken in dem einerseits
der Übergang der Elektronen von dem Enzym zum Mediator schneller ist als der
Spannungsanstieg, bis hin zu einem Bereich in dem die elektrochemisch induzierte Reaktion
schneller wird als der Elektronentransfer vom katalytischen Zentrum zum Mediator. So lässt
sich relativ genau die Geschwindigkeit des Elektronentransfers von dem Enzym zu dem Mediator
bestimmen.
In einem ersten Schritt muss die Differenz zwischen der Leermessung und der katalytischen
Messung ermittelt werden. Danach wird, was vor allem bei Messungen mit hohen
Spannungsvorschubgeschwindigkeiten wichtig ist, zusätzlich die gemessene latente Ladung
im Hintergrund abgezogen. Damit können kleine Ungenauigkeiten der Messung ausgeglichen
werden. Für die weitere Datenbehandlung wurde den Ausführungen von Bourdillon et al [74]
gefolgt und aus den entsprechenden Verhältnissen und den Auftragungen die k 3 Werte berechnet.
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