Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
dem Zugang der einzelnen Teile zu dem aktiven Zentrum des Enzyms liegen. So ist die prosthetische
zu der Elektrode hingewandt, was für die Teilgleichung, die k 2 bestimmt, von Nachteil
ist. Deshalb steigt die Konzentration des Produktes lokal stark an, was zu einer Verschiebung
des Gleichgewichts führt. Somit muss nach dem Massenwirkungsgesetz die Kinetik
kleiner werden als bei einem freidiffundierendem Enzym, ohne räumliche Begrenzung.
Für k 3 verfährt man ebenso wie für k 2 und trägt die Variable, hier der Mediator, gegen den
gemessenen Strom auf. Zur Bestimmung von k 3 wird die folgende Gleichung 13 verwendet
und aus der Steigung extrahiert.
−]^A_ = −!^A_
= 2 ∗ ∗ Γ a
1
@ 6
+ 1 @ 6 b ?
( 15 )
c M ist die Konzentration des Mediators, die hier im Laufe des Experiments erhöht wird. In
den folgenden Abbildungen ist exemplarisch eine Messung zu sehen. Dabei sind links die
Originaldaten aufgetragen und rechts die Grundstromkorrigierten. Es wurde in einer 5 mM
Lösung von NADPH, 0.1 M PB, pH 7.5, gemessen. Somit konnte sichergestellt werden, dass
zu jeder Zeit genug Substrat in der Lösung vorhanden war und lediglich der Mediator den
Elektronenfluss limitiert hat.
1,6
1,4
1,2
1,0
1,6
1,4
1,2
1,0
i [µA]
0,8
0,6
i [µA]
0,8
0,6
0,4
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2 0,0 0,2 0,4
E [V vs Ag/AgCl]
-0,2
-0,2 0,0 0,2 0,4
E vs. Ag/AgCl [V]
Abbildung 25 (links) Messreihe mit Ferrocenmethanol in verschiedenen Konzentrationen und nur in Puffer.
(rechts) Stromantwort nachdem der Grundstrom abgezogen wurde und das Ferrocenmethanol der limitierende Faktor
für den Elektronenübertrag ist. Gemessen wurde in 0.1 M PB, pH 7.5, 5 mM NADPH und 5 mV/s von -0.1 V bis
0.35 V vs Ag/AgCl. Konzentrationen an Ferrocenmethanol 1 µM, 2.5 µM, 5 µM, 7.5 µM, 10 µM, 15 µM und
25 µM.
In den Originaldaten kann man wieder sehen, dass sich nur etwas ereignet, wenn alle
Komponenten zusammen sind. Bei der Messung in reinem Puffer mit der modifizierten Elektrode
wird kein Strom detektiert. Auch nach der Zugabe des Substrats gibt es noch keinen
Strom, was einen direkten Elektronentransfer ausschließt. Erst bei Zugabe des Mediators kann
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