Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
kompensieren. Zusätzlich ist die Wahrscheinlichkeit der 4-his FNR doppelt so groß mit einer
der beiden his-X 3 -his Funktionen in die Nähe eines Metallzentrums zu gelangen und damit
auch eine Bindung auszubilden. Ist die erste Bindung vorhanden steigt auch die Wahrscheinlichkeit
für einen Überlapp der anderen his-X 3 -his Funktionen mit einem Metall, da es eine
erste gerichtete Orientierung im Raum gibt. Diese beiden Vorteile erhöhen die mögliche Anzahl
an Plätzen an der Oberfläche, an die die FNR Mutante binden kann. Die Einstellung des
Gleichgewichts verschiebt sich dadurch zu längeren Zeiten. Der letzte Grund für die längere
Einstellung des Gleichgewichts liegt in der abnehmenden Anzahl an freien Plätzen. Damit
sinkt die Wahrscheinlichkeit eine Stelle zu treffen die groß genug ist den Platz für ein ganzes
Enzym zu bieten und auch weit genug von den anderen Enzymen entfernt ist, damit die repulsiven
Wechselwirkung schwächer sind als die beiden neugeformten Bindungen.
Die nächste Frage die geklärt werden muss ist, warum es bei den Messungen der 2-his
FNR zuerst zu einem Maximum der Adsorption kommt und nicht zu einem Gleichgewicht. In
einem idealen Experiment verändert sich keiner der Reaktanten, also weder das Protein, wenn
es an die Oberfläche bindet, noch die Oberfläche, wenn sich das Protein anlagert. Da sich, wie
in Gleichung ( 9 ) beschrieben, ein Gleichgewicht einstellt muss dies, wiederum in einem idealen
Experiment, auch für die Dissoziation gelten und das gemessene Signal ändert sich nicht
mehr. Bei der 2-his Mutante des FNR Enzyms ist das allerdings nicht der Fall und das Signal
fällt recht schnell nach Erreichen des Maximums ab. Dies kann nur bedeuten, dass sich etwas
verändert, was in dem idealen Experiment nicht passiert. Die Antwort zu dieser Frage liegt in
dem Mechanismus der Desorption. Die Bindung zum Enzym kann sowohl zwischen dem Anker
und der his-X 3 -his Funktion brechen, als auch zwischen dem Ankermolekül und der his-
X 3 -his Funktion, die immer noch das Metallion trägt. Somit hat sich der wieder frei gewordene
Platz verändert und steht nicht mehr für andere Enzyme zur Verfügung. Die Gesamtanzahl
an Plätzen nimmt ab, und damit auch das Signal, da sich die Bedingungen dynamisch verändern.
Durch diese Beobachtung ist eine weitere Bedingung der Langmuir – Isotherme betroffen,
die Forderung nach einer unveränderlichen Oberfläche. Diese essentielle Annahme der
Langmuir – Isotherme ist damit nicht mehr erfüllt und die Ergebnisse nicht mehr als korrekt
betrachtet werden. In Abbildung 16 sind die verschiedenen Dissoziationsprozesse schematisch
dargestellt und erläutern die Veränderung der Oberfläche.
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