Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
Die niedrigen Konzentrationen zeigen noch eine ähnliche Bedeckung, bis ca. 50 nM. Bei
höheren Konzentrationen wird θ 4 his > θ 2 his . Der extremste Fall ist der Unterschied von
200 nM im Fall der 4-his – FNR und der fünfmal höher konzentrierten 2his – FNR wenn beide
Messungen den gleichen Grad der Bedeckung aufweisen, wie Tabelle 2 zu entnehmen ist.
Zusätzlich fällt auf, dass bei der 2-his FNR die Assoziation innerhalb der ersten zehn Minuten
abgeschlossen ist und sich kurz ein Gleichgewicht einstellt, welches dann in eine langsame
Desorption des Enzyms übergeht. Dieses Verhalten ist bei der 4-his FNR nicht zu beobachten.
Im Gegenteil, zum einen ist nur in der niedrigsten Konzentration der Gleichgewichtszustand
erreicht worden und alle anderen Messungen waren noch dabei weiteres Material anzulagern,
zum anderen ist auch in der Dissoziationsphase nur eine leichte Abnahme des Signals zu sehen,
die sich deutlich von dem der 2-his FNR unterscheidet.
FNR
Tabelle 2: Übersicht der prozentualen Bedeckungen in Abhängigkeit der Konzentration und der verwendeten
4-his FNR
2-his FNR
Konzentration/
nM
θ (global) /
%
Konzentration/
nM
θ (lokal) ) /
%
θ (global) ) /
%
500 0,66 1000 0,91 0,39
100 0,42 200 0,48 0,21
50 0,28 100 0,36 0,16
25 0,17 50 0,20 0,09
12.5 0,08 25 0,08 0,03
Nach den ersten Betrachtungen der Messungen gehen wir jetzt dazu über die Messwerte
gegen die Konzentrationen aufzutragen, damit die Dissoziationskonstanten nach Gleichung
( 11 ) berechnet werden können. wie in den einleitenden Worten zu diesem Teilkapitel bereits
gesagt, handelt es sich bei dieser Betrachtung um die halbmaximale Bedeckung der Oberfläche,
ausgehend von den ermittelten Maximalwerten der Messreihen und der daraus approximierten
Maximalbedeckung B max . Da die 2-his FNR innerhalb der ersten zehn Minuten bereits
ihr Maximum überschreitet ist auch die mathematisch erreichbare Oberflächenbedeckung für
dieses System nicht sehr hoch. Aus Tabelle 2 wird deutlich, dass für dieses Enzym, auf dieser
Oberfläche bereits 91 % der zugänglichen Plätze belegt sind wenn eine 1 µM Enzymlösung
über die Oberfläche gespült wird. Dies bedeutet jedoch bei einer globalen Betrachtung nicht,
dass das alle zugänglichen Plätze auf der Oberfläche sind. Die 4-his FNR zeigt eine deutlich
dichtere Packung auf den Sensoroberflächen, was, wird die maximale Bedeckung ausgehend
von den ermittelten Werten der 4-his FNR auch für die 2-his FNR zugrunde gelegt, den Bedeckungsgrad
auf 39 % herabsetzt. Aus diesen Gründen ist hier ein Verhältnis von
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