Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
zyms schließen lässt. Zuerst muss festgehalten werden, dass alle Werte in der gleichen Region
liegen. Zwar ist wieder der Wert des nativen Enzyms höher als die Werte der genetisch veränderten
Mutanten, aber diese sind nicht so gravierend, dass hier von einem Fehlschlag gesprochen
werden kann. Viel eher ist festzuhalten, dass die Ermittlung kinetischer Daten von
Enzymen äußerst anspruchsvoll ist und hier eine grundlegende Strategie entwickelt wurde, die
erste ermutigende Werte liefert. Von dem nativen Enzym zu dem 2-his FNR Enzym ist der
größte Abstieg an Aktivität zu sehen. Interessanterweise steigt der Wert dann wieder vom 2-
his zum 4-his FNR Enzym deutlich an.
Der letzte Wert, der k red , ist nur aus den hier bereits aufgeführten Werten zu ermitteln. Um
die folgende Diskussion zu erleichtern wird an dieser Stelle kurz die Bedeutung verschiedener
Entwicklungen möglicher Werte diskutiert. Die Definition des K Μ ist in Gleichung ( 7 ) gegeben.
Darin ist ersichtlich, dass es sich hierbei um zwei unabhängige Reaktionen handelt, die
beide von der Konzentration des Enzymsubstratkomplexes abhängig sind. Zum einen die
Rückreaktion, die wieder zum Verlust des Substrats aus Sicht des Enzyms führt und die Umsetzung
zum Enzymproduktkomplex. Da bekannt ist, dass die Reaktion mit hohen Geschwindigkeiten
abläuft kann auch davon ausgegangen werden, dass k 1 > k -1 ist. Im Weiteren können
wir die zuvor bestimmten k 2 Werte betrachten, die auch einen Teil zu der Gleichung beisteuern.
Der Unterschied zwischen den Werten für die genetisch modifizierten Enzyme ist dermaßen
klein, dass sich daraus kaum große Änderungen für den k red erklären lassen würden. Als
logische Konsequenz bleibt nur noch das zweite Gleichgewicht, welches sich an dieser Konstanten
beteiligt. Für die Werte bedeutet dies, dass k red nur unter zwei Bedingungen zu größeren
Werten streben kann. Entweder wird der Nenner kleiner, was mit einer Verringerung der
Zugänglichkeit der enzymatischen Tasche verbunden wäre, oder der Zähler wird größer, was
mit einer Zunahme einer der beiden Folgereaktionen zu tun hat. Da die eine Reaktion durch
die ermittelten k 2 Werte hinreichend beschrieben ist fällt diese Erklärung in großen Teilen
raus. Somit ist in der logischen Konsequenz eine schlechtere Bindung zwischen dem Enzym
und dem Substrat ein Auslöser. Dies ist der Fall für die 2-his FNR, die die höchsten Werte für
k red aufweist. Ob k 1 kleiner wird oder k 2 zunimmt, konnte unter den gegebenen Umständen
nicht geklärt werden. Im Gegensatz dazu sind die Werte für die anderen beiden Enzymvarianten
erstaunlich nah beieinander.
Nachdem gezeigt werden konnte, dass die Veränderung der äußeren Struktur der Enzyme
durch die „intrachain his tag“ Funktionen nur geringe Auswirkungen auf die globale Reaktionskinetik
hat, wird im nächsten Abschnitt die Anbindung der Enzyme an die modifizierten
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