Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
DNS – Strangs, was sich in der Absenkung des Signals bemerkbar macht. In der Dissoziationsphase
wird die Lösung vor der Sensoroberfläche gegen Puffer ausgetauscht und die Konzentration
des Analyten auf null gesetzt. Dadurch stellt sich das Gleichgewicht zwischen adsorbierten
und desorbierten Stoffen neu ein und ein Teil (in dem theoretischen Beispiel alles)
des Analyten geht wieder in Lösung. Aus der Form der Kurven lässt sich mit mathematischen
Methoden, analog zu den oben beschriebenen Teilen in der SPR Spektroskopie, die Adsorptions-
und Desorptionskonstante (k on und k off ) bestimmen und aus dieser dann die Dissoziationskonstante
(K D ).
Im konkreten Fall der 2 – und 4 – his FNR sind die Messungen in der folgenden Abbildung
30 zu sehen.
Abbildung 30: links zeigt die Messungen der 4 – his FNR; rechts zeigt die Messungen der 2 – his FNR. Alle Messungen
wurden in 0.5 M PB, pH 7.5, durchgeführt.
Wie auch schon vorher in den SPR Messungen beobachtet benötigt die 4 – his FNR etwas
länger zur Ausbildung der Bindung (τ 4-his > τ 2-his). Aber auch in der sonstigen Betrachtung
der Messungen sieht man hier die bisherigen Ergebnisse bestätigt. Beide Enzyme binden gut
an der verwendeten Oberfläche, die etwas anders aufgebaut ist als diejenige, welche in den
vorhergehenden Experimenten verwendet wurde. Die entsprechenden Übergangsmetalle sind
an einen tris-NTA Linker gebunden. Anhand der großen Anzahl an NTA Funktionen und der
somit höheren Konzentration an Übergangsmetallionen, die für eine Bindung des Enzyms
bereit stehen ist zu erwarten, dass das Enzym eine höhere Affinität zu dieser Oberfläche aufweisen
wird und der K D – Wert kleiner ausfällt als bei den SPR Experimenten.
Interessant wird es jetzt bei dem Dissoziationsverhalten der Enzyme, welches in Abbildung
31 vergleichend dargestellt ist.
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