Immobilisierung

Ergebnisse und Diskussion
die detektiert wird. Der Winkel mit der geringsten Intensität in diesem Tal wird Resonanz –
oder SPR – Winkel genannt.
Nachdem die Erzeugung des Signals geklärt wurde, besteht immer noch die Frage wie
sich das Signal über die Zeit ändern soll, wenn es keine Wechselwirkung zwischen dem Licht
und dem Analyten gibt. In der Tat verhält es sich bei der SPR – Spektroskopie so, dass es
einen trockenen und einen nassen Bereich gibt, und beide Bereiche durch den Metallbeschichteten
Objektträger räumlich voneinander getrennt sind. Das Laserlicht bleibt auf der trockenen
Seite und wird abgeschwächt reflektiert, und auf der anderen Seite, in Lösung, findet die
Chemie statt. Auch wenn es eine räumliche Trennung zwischen den beiden Bereichen gibt,
sind sie über die angeregten, oszillierenden Plasmonen miteinander verbunden, was umgekehrt
bedeutet, dass das ganze System von einfachen physikalischen Charakteristika, wie dem
Brechungsgesetzt und den optischen Dichten der Medien, bestimmt wird. Da auf der trockenen
Seite keine Änderung zu erwarten ist und auch in einem gut geplanten Experiment nicht
stattfinden wird, da es dann mit einem Phasentransfer des Glases zusammenhängt, kann sich
die optische Dichte nur auf der nassen Seite ändern. Die optischen Dichten von wässrigen
Puffern und Proteinen unterscheiden sich, was zur Folge hat, dass die Eigenschaften des ganzen
Systems geändert werden. Daraus folgt eine Änderung des Resonanzwinkels in Abhängigkeit
der adsorbierten Menge an Protein vor der Metalloberfläche. Von dieser Information
ist es ein leichtes ein kontinuierliches Signal gegen die Zeit aufzutragen 4 , was, in erster Linie
eine qualitative Antwort über ein mögliches Adsorptionsverhalten und in weiteren Fragestellungen
die Lösung der Dissoziationskonstanten der genetisch veränderten FNR – Enzyme an
die modifizierte Oberfläche gibt.
Im nächsten Schritt, nachdem das Messprinzip der SPR – Spektroskopie kurz umrissen
wurde, muss die Grundlage für die Bestimmung der Gleichgewichtsdissoziationskonstanten
(K D ) im Allgemeinen und der Dissoziationskonstanten im Besonderen, die im Zuge dieser
Arbeit ermittelt wurden, geschaffen werden.
Neben der uneingeschränkten Aktivität der genetisch veränderten Enzyme ist es wichtig
zu wissen ob sie auch an strukturierte Oberflächen binden. Zudem muss untersucht werden
wie gut sie an die Oberflächen binden und wie stabil diese Bindung ist. Ein weithin bekanntes
Modell zur Untersuchung des Adsorptionsverhaltens von Stoffen an Oberflächen wurde von
Langmuir entwickelt. Es ist die einfachste Sorptionsisotherme, die eine physikalische Grund-
4 Bei dem verwendeten Gerät (Autolab Twingle) wurden 10 Winkelmessungen pro Sekunde durchgeführt
mit einer Genauigkeit von 0.1 m°
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