Immobilisierung

Experimentelle Durchführung
ben wurde. Die Konzentrationen und Zugaben für die Messung können aus der folgenden
Tabelle 11 entnommen werden.
Level
Tabelle 11 gibt die Zugaben für die Substratlösung an
Ziel C NADPH /
mM
V ges an Substratlösung/
µl
V ini in der Lösung/
µl
Benötigtes Volumen an
Substratlösung/
µl
1 0,050 2,50 0,00 2,50
2 0,100 5,00 2,50 2,50
3 0,150 7,50 5,00 2,50
4 0,200 10,00 7,50 2,50
5 0,400 20,00 10,00 10,00
6 0,600 30,00 20,00 10,00
7 0,800 40,00 30,00 10,00
8 1,000 50,00 40,00 10,00
9 2,000 100,00 50,00 50,00
10 3,000 150,00 100,00 50,00
6.4.3 Messung von k 3
Die Elektroden wurden wie unter 6.4.1 beschrieben gereinigt und gelagert. Das Enzym
wird mit UV/VIS – Spektroskopie untersucht, um die Konzentration zu ermitteln. Dafür wird
zuerst eine Stammlösung mit 0.1M PB, pH 7.5, als Hintergrund vermessen und dann mit der
Enzymlösung (1-2 µL) vermischt. Mit dieser Stammlösung wird eine Messzelle mit 0.5 µM
Enzym, 0.1 M, pH 7.5 und 5 mM NADPH und einer Dreielektrodenanordnung mit der gereinigten
Goldelektrode als WE, einem frisch abgebrannten Pt-Draht als CE und einer Ag/AgCl
RE. Von dieser Messlösung werden ZV's aufgenommen von (-0.1 V – 0.35 V) vs. Ag/AgCl.
Die unterschiedlichen Spannungsvorschubgeschwindigkeiten sind (2, 5, 7.5, 10, 15, 20, 50,
100, 250, 500, 750, 1000) mV/s.
Eine 2 mM Ferrocenmethanolstammlösung mit 0.1 M PB, pH 7.5, wird hergestellt. Es
werden 25 µl von der Messlösung mit der Ferrocenmethanolstammlösung ausgetauscht und
die ZV's unter den gleichen Bedingungen und Spannungsvorschubgeschwindigkeiten gemessen.
6.4.4 Generelle Anbindung eines Dendrimers
Die Anbindung der Dendrimere an Goldelektroden wurde elektrochemisch verfolgt. Ein
100 µl Aliquot mit Dendrimerlösung wird aufgetaut und mit 5 µl TCEP vermischt. Die
Dendrimerlösung wird in 1.9 ml entgasten 0.05 M BP, 0.1 mM KNO 3 , pH 7.5, unter Ar At-
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