PROGRAMA PDF - Grupo de Pesquisa em Pré-Processamento de ...

IV. MATERIALES Y MÉTODOS
IV.1.Crecimiento de
Pseudomonas fragi
Se utilizó la cepa ATCC 4973
que se obtuvo en forma
liofilizada del cepario del Centro
de Investigación de Estudios
Avanzados del Instituto
Politécnico Nacional
(CINVESTAV-IPN), México D.F.
Se inocularon 25 ml de medio
TSB (Tripticase Soy Broth) con
el cultivo reactivado
previamente. Los matraces se
inocularon a 19 o C por 36 horas.
Para conocer si había
contaminación de la cepa, se
realizó tinción de Gram y
observación al microscopio.
Posteriormente, en tubos de
ensayo se adicionó con las
concentraciones de aceites de
ajo y cebolla y sus
combinaciones, además de un
testigo sin aceites, se inoculó al
1 % del cultivo con una densidad
óptica = 1. Los tubos se
incubaron a 19 o C por un total de
2 días, midiéndose la densidad
óptica cada 4 horas durante 2
días. Estas pruebas se
realizaron por triplicado y en dos
repeticiones.
IV.1.1. Metodología
experimental
Tabla 1. Algunas enzimas inhibidas
por la alicina encontrada en el
ajo (Allium sativum)
ENZIMA REFERENCIA
Acetil CoA ligasa Zollner, 1993.
Acetil Co A
Focke y col.,
sintetasa
1990.
Alcohol
dehidrogenasa
Zollner, 1993.
-hidroxi-decanoil
tioester dehidrasa
Weete, 1980.
Colin esterasa Zollner, 1993.
Colin oxidasa Zollner, 1993.
Exokinasa Zollner, 1993.
Fosfatasa alcalina Zollner, 1993.
Fosfo trans
Focke y col.,
acetilasa
1990.
Glioxilasa Zollner, 1993.
Glutation reductasa Zollner, 1993;
Davison y
Branen . 1993;
Voet y Voet 1995.
L- lactato
deshidrogenasa
Zollner, 1993.
Papaína Zollner, 1993.
Sulfihidril reductasa Davison y Branen
, 1993.
Succinato
deshidrogenasa
Zollner, 1993.
Superóxido
dismutasa
Zollner, 1993.
Triosa fosfato
deshidrogenasa
Zollner, 1993.
Ureasa Zollner, 1993.
Xantin oxidasa Sklan y col.,
1992.
Se prepararon diluciones de los aceites esenciales de ajo y cebolla para obtener
las concentraciones y cantidades probadas en los medios de cultivo sintéticos
(Morales y Guerrero, 1998). Posteriormente, en tubos de ensayo adicionados con
las concentraciones de aceites de ajo y cebolla y sus combinaciones según lo
indica la Tabla 1, además de un testigo sin aceites, posteriormente se inocularon
los tubos y se tomaron las lecturas de la absorbancia a 560 nm