Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Material und Methoden
3.4 Einfluss der Lagerung von Kotproben auf den Gehalt von
L. intracellularis
Genomische DNA ist in verschiedenen Probenmatrices unterschiedlich lange
nachweisbar. Grundsäztlich kann die Temperatur und die Dauer der Lagerung einen
Einfluss auf die Menge intakter und damit amplifizierbarer DNA nehmen. Ziel dieser
Untersuchung war es, einen möglichen Einfluss der Temperatur und der Dauer einer
Lagerung von Kotproben auf den Nachweis resp. die Quantifizierung von L.
intracellularis mittels real-time PCR zu überprüfen.
Die Untersuchung wurde an Kotproben natürlich infizierter Schweine aus einem
bereits auf L. intracellularis positiv getesteten Bestand durchgeführt. Von 20
Schweinen wurde rektal unter Verwendung von Einmalhandschuhen Kot entnommen.
Die Proben wurden in Probengefäßen mit Kotlöffeln aus Stuhlröhren homogenisiert.
Für die weitere Untersuchung wurde zunächst mittels real-time PCR festgestellt,
welchen Gehalt spezifischer Genomfragmente von L. intracellularis die Proben im
„frischen“ Zustand aufweisen (Tab. 37, Tag 0). Von 10 positiven Proben wurden
jeweils 24 Aliquots zu je 200 mg in EC 2.0 eingewogen. Die Aliquots wurden
entweder bei 6 °C im Kühlschrank, bei -20 °C im Gef rierraum oder bei -70 °C im
Tiefkühlgefrierschrank gelagert und zu unterschiedlichen Zeitpunkten untersucht
(Tab. 37 und 38).
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