Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Ergebnisse
hellblaue sowie blaue Kolonien sichtbar. Da nur für weiße Kolonien angenommen
werden kann, dass die E. coli erfolgreich mit Insert tragenden Plasmiden
transformiert wurden, sind nur Bakterien der weißen Kolonien in Flüssigmedium
überimpft und anschließend mittels real-time PCR zur Kontrolle der erfolgreichen
Transformation und Klonierung untersucht worden. Das Insert konnte in allen Klonen
nachgewiesen werden (Abb. 6); zum Teil lagen so große Mengen der Plasmide mit
der Zielsequenz vor, dass das real-time Gerät aufgrund der hohen Ausgangsmenge
der template-DNA keine normierte und baseline-korrigierte Reporterfluoreszenz (∆
Rn) darstellen konnte.
Abbildung 6: amplification plot zur Überprüfung der Transformation
kompetenter E. coli; es wurden 40 Klone überprüft, die alle die
Zielsequenz trugen;
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