Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Literaturübersicht
Lagerung bei -80 °C immer noch spezifische Genomfra gmente von L. intracellularis
mittels nested-PCR detektiert werden (JONES et al. 1993).
2.6.3 Inhibitoren
Substanzen, die eine PCR inhibieren können, sind unterschiedlichen Ursprungs.
Inhibitoren können aus der Probe selbst stammen (RADSTRÖM et al. 2004).
Typische Inhibitoren in Kot- bzw. Stuhlproben sind bspw. Bilirubin, Gallensalze,
komplexe Polysaccharide, die hohe Ausgangsmenge an Mikroorganismen,
Hämoglobin und dessen Abbauprodukte, Harnstoff und Heparin (MONTEIRO et al.
1997, SAULNIER u. ANDREMONT 1992, DAHLENBORG et al. 2001,
WIDJOJOATMODJO et al. 1992). Inhibitoren können aber auch Substanzen sein, die
bei der Probenaufbereitung aktiv eingesetzt wurden (RADSTRÖM et al. 2004). Der
inhibitorische Mechanismus verschiedener Substanzen beruht im Allgemeinen auf
drei zentralen Punkten. Zum einen können sie im Rahmen der Probenaufbereitung
die Zelllyse negativ beeinflussen. Zum anderen können sie die DNA degradieren
oder an diese binden, so dass die Polymerase an diese Strukturen nicht mehr binden
kann. Schlussendlich ist auch eine Hemmung der Aktivität der DNA-Polymerase
möglich. Dabei kann ein Inhibitor auf mehrere Arten durch chemische, physikalische
und enzymatische Reaktionen wirken (WILSON 1997). Einige Stoffe, wie
Dimethylsulfoxid (DMSO), Glycerin oder Polyethylenglykol, wirken in niedrigen
Konzentrationen als Agonisten der PCR, in höheren Konzentrationen allerdings als
Inhibitoren (MÜLLER 2001).
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