Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

3.5 Statistik
Material und Methoden
Für die statistische Auswertung erfolgte zunächst ein Export der Daten aus der
Software SDS Version 1.4 als Microsoft Office Excel Comma Seperated Value File.
Die Daten wurden anschließend in Microsoft ® Office Excel 2003 SP2 importiert und
in einem spread sheet organisiert. Die Testergebnisse aus vergleichenden
Untersuchungen wurden mit dem Statistical Analysis System for Windows, SAS ® ,
Version 9.1 (SAS Inst., Cary, NC, USA) analysiert.
Die Standardkurve der PCR wurde aus den Mittelwerten einzelner Ct-Werte von
Plasmidlösungen mit den Konzentrationen 10 0 bis 10 7 GE / µl Reaktionsvolumen
erstellt. Unterschiede zwischen den mittleren Ct-Werten jeder Konzentration wurden
mit einem zweiseitgen T-Test überprüft (PROC MEANS). Aus der Standardkurve
wurden die Effizienz, die Wiederholpräzision, das Detektions- und das
Quantifizierungslimit der real-time PCR abgeleitet.
Der Grenzwert für die Präzision liegt für bioanalytische Verfahren (für Werte oberhalb
der unteren Quantifizierungsgrenze) bei maximal 15 % relative Standardabweichung
vom Mittelwert für die jeweilige Konzentrationsstufe (ANON. 2001). Daraus folgt für
die Präzision ein Mindestwert von 85 %. Dieser Wert wurde für die Auswertung der
Präzision der real-time PCR als Grenzwert angenommen. Die Ct-Werte der
Untersuchungen zur Feststellung der Vergleichspräzision wurden mit den Werten der
Standardkurve verglichen. Ein Ergebnis wurde als „präzise“ bezeichnet, wenn die
Abweichung des Ergebnisses in der jeweiligen Konzentrationsstufe kleiner 15 % der
relativen Standardabweichung vom Mittelwert der Standardkurve war. In gleicher
Weise wurden die Ergebnisse der Untersuchungen zur Vergleichspräzision anhand
von Kotproben natürlich infizierter Schweine und zur Wiederholpräzision analysiert.
Der Mittelwert und die Standardabweichung wurden für jeden Versuch getrennt
berechnet.
Die Übereinstimmung der Ergebnisse aus den Untersuchungen zur Feststellung der
diagnostischen Sensitivität und Spezifität wurde an einer 2 x 2-Felder-Tafel
vorgenommen.
Die Robustheit wurde anhand eines Vergleichs der PCR-Ergebnisse vor und nach
einer Bearbeitung der Proben berechnet und als prozentuale Abweichung vom
Ausgangswert angegeben.
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