Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Literaturübersicht
von zahlreichen Autoren in verschiedenen Studien zur Untersuchung der
Epidemiologie der L. intracellularis-Infektion sowie zur Prüfung der Wirksamkeit von
Antibiotika und Impfstoffen eingesetzt (DÜNSER et al. 2003, NASCIMENTO
CHIRIBOGA et al. 1999, JACOBSON et al. 2005, JENSEN et al. 2000, JENSEN et al.
2005, KOYAMA et al. 2006 und weitere).
L. Intracellularis kann auch mittels multiplex-PCR, die Genomfragmente unter-
schiedlicher Erreger gleichzeitig detektiert, nachgewiesen werden. Es wurden
verschiedene multiplex-PCRs entwickelt, die einen schnellen Ausschluss von
Differentialdiagnosen zulassen. Eine triplex-PCR zum Nachweis von L. intracellularis,
B. hyodysenteriae und Salmonella ssp. aus Kot und Darmmukosa konnte als
spezifisch beurteilt werden, jedoch war die Sensitivität für S. typhimurium zehnmal
niedriger als in der entsprechenden uniplex-PCR (SUH u. SONG 2005). Eine weitere
triplex-PCR zum Nachweis von L. intracellularis, Serpulina hyodysenteriae und
Salmonella ssp. zeigte, mit Ausnahme einer einzigen Probe, eine 100 %ige
Übereinstimmung mit den Ergebnissen klassisch kultureller Nachweisverfahren resp.
der histopathologischen Untersuchung (ELDER et al. 1997). In einer anderen Studie
wurde die untere Nachweisgrenze bei der simultanen Detektion von L. intracellularis,
B. hyodysenteriae und B. pilosicoli in Kotproben von Schweinen mit 10 2 bis 10 3
Zellen pro Gramm Kot angegeben. Vergleicht man diese Ergebnisse mit dem
kulturellen Nachweis von B. hyodysenteriae und B. pilosicoli resp. der uniplex-PCR
von L. intracellularis ergibt sich eine Sensitivität von 97,3 % für die multiplex-PCR
(LA et al. 2006). In einer duplex-PCR können L. intracellularis und Salmonella ssp
parallel nachgewiesen werden. Die Sensitivität ist genau so hoch wie bei
beschriebenen uniplex-PCR-Methoden (BACCARO et al. 2003). In 2002 wurde ein
5´-nuclease assay zur Detektion von L. intracellularis etabliert und mit
immunhistochemischen Untersuchungsverfahren verglichen (LINDECRONA et al.
2002). Das Zielgen dieser real-time PCR war die 16S ribosomale DNA, die auch
schon von anderen Autoren als Zielgen gewählt wurde (u.a. KNITTEL et al. 1998,
JONES et al. 1993, ZMUDZKI et al. 2004). Mit dieser PCR-Methode ist neben dem
sehr schnellen, hochspezifischen Nachweis auch eine Quantifizierung des Gehalts
spezifischer Genomfragmenten möglich. Die Nachweisgrenze beträgt ein genome
eqiuvalent (GE) von L. intracellularis pro PCR-tube bei einem threshold cycle (Ct)-
Wert von 35,7; das entspricht 4 x 10 4 GE L. intracellularis pro Gramm Kot. Die
Übereinstimmung der Testergebnisse der real time-PCR und der Immunhistochemie
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