Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Ergebnisse
Eine Konzentration von 300 nM des forward- und reverse-Primer im Reaktionsmix
wurde als grundsätzlich ausreichend erachtet. Trotzdem wurde dieser Konzentration
eine Sicherheitsspanne von 200 nM zuaddiert, so dass die Konzentration beider
Primer für die weiteren PCR-Untersuchungen auf 500 nM festgelegt wurde. Die
Spezifität der Primer konnte anhand einer Schmelzkurvenanalyse der PCR-Produkte
gezeigt werden, bei der nur ein Schmelzpunkt nachweisbar war.
300/300 nM bis
900/900 nM
95
50/50 nM bis
50/300 nM
Abbildung 2: amplification plot zur Optimierung der Primer-Konzentration,
gezeigt sind alle Kombinationen zwischen 50 und 900 nM
forward- und revese-Primer bei Amplifikation spezifischer
Genomfragmente von Lawsonia intracellularis MS B3903
4.1.3 Überprüfung der analytischen Spezifität der Primer
Die Amplifikationen von DNA der Referenzstämme mit den Primern Li-Ubi-F und –R
ergaben bei einzelnen Bakterienstämmen positive Ergebnisse. Die Ct-Werte
betrugen für Erysipelothrix rhusiopathiae 42,9, für Listeria monozytogenes 40,