Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Weitere Magazine

Empfehlungen

Info

Literaturübersicht Polymerase, isoliert aus Pyrococcus furiosus, hat eine proofreading-Aktivität und dadurch eine zehnfach höhere Amplifikationsgenauigkeit als die Taq-Polymerase (LUNDBERG et al. 1991). Die Tth-Polymerase, isoliert aus Thermus thermophilus, ist durch die Fähigkeit gekennzeichnet, sowohl die reverse Transkription als auch die DNA-Amplifikation durchführen zu können (MYERS u. GELFAND 1991). Weitere thermostabile Polymerasen sind aus verschiedenen Bakterien isoliert worden (ARNHEIM u. ERLICH 1992). Mit dem Ziel eine höhere Sensitivität und Spezifität der PCR zu erreichen, wurde eine hot start Technik für die PCR entwickelt, die eine Erhitzung des Reaktionsgemisches vor der eigentlichen Amplifikation beinhaltet (D’AQUILA et al. 1991). Auf diese Weise wird eine extension von Primern, die bei niedrigen Temperaturen unspezifisch an DNA binden können, und die Bildung von Primer- Dimeren verhindert. Diese hot start-Technik wird durch den Einsatz veränderter Polymerasen vereinfacht. Diese können chemisch oder durch die Verwendung monoklonaler Antikörper zunächst inaktiviert sein. Eine Aktivierung erfolgt durch eine Erhitzung auf 95°C. (LORKOWSKI u. THIEMANN 2006, S CALICE et al. 1994). Kältesensitive Mutanten der Taq-Polymerase, die resistent gegen Temperaturen von 95 °C sind, wurden ebenfalls beschrieben (KERMEKCHI EV et al. 2003). 2.5.4 weitere Reagenzien Die dNTP´s sind die Grundelemente des neu zu synthetisierenden DNA-Strangs (MULLIS u. FALOONA 1987). Die Nukleotide sollten dem PCR-Ansatz in äquimolaren Konzentrationen zugesetzt werden, um die Wahrscheinlichkeit eines fehlerhaften Einbaus von Nukleotiden durch Überangebot einer Base während der Synthese zu verringern (INNIS et al. 1988). Die optimale Konzentration der Nukleotide ist abhängig von der Länge des PCR-Produktes, der Anzahl der Zyklen, den Primern und der Menge von zugesetztem Magnesiumchlorid (MÜLLER 2001) und liegt etwa zwischen 50 und 200 µM (INNIS et al. 1988). Des Weiteren benötigt die DNA-Polymerase für ihre enzymatische Aktivität Magnesiumionen als zweiwertige Kationen, weniger gut eignen sich Manganionen (CHIEN et al. 1976). Diese Magnesiumionen beeinflussen ebenfalls das annealing der Primer und die Schmelztemperatur von ds-DNA (STEFFAN u. ATLAS 1991). Kalium- bzw. 29
Literaturübersicht Natriumchlorid fördern in niedrigen Konzentrationen (40 mM resp. 60 mM) die katalytische Aktivität der Taq-Polymerase, in hohen Konzentrationen kommt es allerdings zur Inhibierung der Polymerase. Darüber hinaus ist es für die Prozessivität der Polymerase notwendig im Reaktionsansatz einen stabilen pH-Wert zwischen 7,0 und 8,0 durch die Auswahl eines geeigneten Puffersystems herzustellen (CHIEN et al. 1976). Der PCR können weitere Substanzen, bspw. Formamid oder Glycerin, zugesetzt werden, um den Ablauf der PCR positiv zu beeinflussen (LORKOWSKI u. THIEMANN 2006). 30
Seite 1 und 2: Quantitativer Nachweis von Lawsonia
Seite 3 und 4: Wissenschaftliche Betreuung: Priv.-
Seite 6 und 7: Inhaltsverzeichnis 1 Einleitung....
Seite 8 und 9: 3.2.18 Wiederfindungsrate .........
Seite 10 und 11: µg Mikrogramm (x 10 -6 ) µl Mikro
Seite 12: p.i. post infectionem PCR polymeras
Seite 15 und 16: 2 Literaturübersicht Literaturübe
Seite 17 und 18: 2.2 Lawsonia intracellularis Litera
Seite 19 und 20: Literaturübersicht Desinfektionsmi
Seite 21 und 22: Literaturübersicht Altersgruppe de
Seite 23 und 24: Literaturübersicht Darmschleimhaut
Seite 25 und 26: Subklinischer Verlauf: Literaturüb
Seite 27 und 28: Literaturübersicht Schweine, die m
Seite 29 und 30: Literaturübersicht Makroskopische
Seite 31 und 32: Literaturübersicht wässrigem, gel
Seite 33 und 34: Literaturübersicht (KROLL et al. 2
Seite 35 und 36: Literaturübersicht war 91 %, wobei
Seite 37 und 38: Literaturübersicht Antikörpern au
Seite 39 und 40: Literaturübersicht synthetisierten
Seite 41: Literaturübersicht al. 1993). Auß
Seite 45 und 46: Literaturübersicht Die Lyse von Ze
Seite 47 und 48: Literaturübersicht Lagerung bei -8
Seite 49 und 50: Nichtspezifische Detektionssysteme
Seite 51 und 52: Hydrolysesonde (TaqMan -Sonde) Lit
Seite 53 und 54: Primer zur spezfischen Detektion Li
Seite 55 und 56: Literaturübersicht sollte allen Sc
Seite 57 und 58: Literaturübersicht der behandelten
Seite 59 und 60: 3 Material und Methoden Material un
Seite 61 und 62: Testparameter Definition Bestimmung
Seite 63 und 64: Material und Methoden Tabelle 2: De
Seite 65 und 66: Tabelle 3: Primer der real-time PCR
Seite 67 und 68: Tabelle 6: Referenzstämme Bakterie
Seite 69 und 70: Material und Methoden dem Vortex ge
Seite 71 und 72: Material und Methoden Temperaturgra
Seite 73 und 74: Material und Methoden 3.2.5 Optimie
Seite 75 und 76: Material und Methoden Tabelle 11: P
Seite 77 und 78: Material und Methoden Tabelle 14: P
Seite 79 und 80: Material und Methoden 3.2.8 Überpr
Seite 81 und 82: Material und Methoden Der Reaktions
Seite 83 und 84: 3.2.10 Sequenzierung Material und M
Seite 85 und 86: 3.2.11 Klonierung Material und Meth
Seite 87 und 88: Material und Methoden Die PCR-Produ
Seite 89 und 90: Material und Methoden 3.2.12 Verdü
Seite 91 und 92: Material und Methoden Tabelle 25: R
Seite 93 und 94:
Material und Methoden Tabelle 26: P
Seite 95 und 96:
Seite 97 und 98:
3.2.17 Wiederholpräzision Material
Seite 99 und 100:
Seite 101 und 102:
Seite 103 und 104:
Seite 105 und 106:
Material und Methoden Tabelle 37: U
Seite 107 und 108:
4 Ergebnisse 4.1 Etablierung und Va
Seite 109 und 110:
Ergebnisse Arcanobacterium pyogenes
Seite 111 und 112:
4.1.6 Sequenzierung Ergebnisse Die
Seite 113 und 114:
Ergebnisse hellblaue sowie blaue Ko
Seite 115 und 116:
Ergebnisse Mit einer Konzentration
Seite 117 und 118:
10 8 GE / µl Ergebnisse 10 7 bis 1
Seite 119 und 120:
4.1.10 Vergleichspräzision Ergebni
Seite 121 und 122:
4.1.11 Wiederholpräzision Ergebnis
Seite 123 und 124:
Ergebnisse Tabelle 41: diagnostisch
Seite 125 und 126:
Ergebnisse entspricht einer Wiederf
Seite 127 und 128:
4.1.15 Messunsicherheit Ergebnisse
Seite 129 und 130:
Ergebnisse Tabelle 44: Ergebnisse d
Seite 131 und 132:
Quantität GE / µl Reaktionsvolume
Seite 133 und 134:
5 Diskussion Diskussion Die vorlieg
Seite 135 und 136:
Diskussion gebildet werden. Verglei
Seite 137 und 138:
Diskussion Bindung der Primer und d
Seite 139 und 140:
Diskussion Milliliter mit 50 µl) u
Seite 141 und 142:
Diskussion Die Effizienz einer Ampl
Seite 143 und 144:
Diskussion Inhibitoren während der
Seite 145 und 146:
Diskussion Proben spezifische Genom
Seite 147 und 148:
Diskussion 5.2 Verteilung von L. in
Seite 149 und 150:
5.4 Schlussfolgerungen Diskussion D
Seite 151 und 152:
Zusammenfassung auch zur Erstellung
Seite 153 und 154:
Summary genome equivalent per react
Seite 155 und 156:
ANONYM (1998b): Literaturverzeichni
Seite 157 und 158:
Literaturverzeichnis BOESEN, H.T.,
Seite 159 und 160:
Literaturverzeichnis CORZO, C.A., R
Seite 161 und 162:
Literaturverzeichnis GROSS-BELLARD,
Seite 163 und 164:
Literaturverzeichnis HOLLAND, P.M.,
Seite 165 und 166:
Literaturverzeichnis JORDAN, D.M.,
Seite 167 und 168:
Literaturverzeichnis KUBISTA, M., J
Seite 169 und 170:
Literaturverzeichnis LINDECRONA, R.
Seite 171 und 172:
Literaturverzeichnis MARSTELLER, T.
Seite 173 und 174:
Literaturverzeichnis MCORIST, S., A
Seite 175 und 176:
Literaturverzeichnis NIEDERHAUSER,
Seite 177 und 178:
SAIF, L.J., u. R.D. WESLEY (1999):
Seite 179 und 180:
Literaturverzeichnis SUH, D.-K., S.
Seite 181 und 182:
Literaturverzeichnis WIDJOJOATMODJO
Seite 183 und 184:
Anhang 7 12.12 12.1066667 7 12.11 6
Seite 185 und 186:
Anhang Tabelle 47: Quantität von G
Seite 187 und 188:
Anhang Tabelle 51: Ergebnisse der q
Seite 189:
Danksagung Ich danke Frau Priv.- Do
Alle anzeigen

Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Erfolgreiche ePaper selbst erstellen

Template löschen?

Als Template speichern?