Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

3 Material und Methoden
Material und Methoden
Die vorliegende Untersuchung wurde mit dem Ziel durchgeführt, eine real-time PCR
zum Nachweis spezifischer Genomfragmente von L. intracellularis zu etablieren. Die
Methode soll darüber hinaus die Möglichkeit bieten, die Erregermenge im
Probenmaterial zu quantifizieren. Im Gegensatz zu konventionellen PCR-Verfahren,
die auf einer Analyse der PCR-Produkte mittels Gelelektrophorese basieren und sich
nur sehr bedingt für eine Quantifizierung eignen, werden mittels real-time PCR
präzise Messwerte einer metrischen Skala ermittelt. Anhand des Messwertes kann
unter Verwendung von Standards die Menge eines Genomfragments in der
ursprünglichen Probe berechnet werden. Neben diesem Vorteil gegenüber
konventionellen PCR-Verfahren zeichnen sich real-time PCR-Verfahren durch eine
höhere Sensitivität aus, weil das Messsignal nicht vom menschlichen Auge, sondern
von einem optischen Sensor erfasst wird.
Im zweiten Abschnitt wurde das etablierte Testsystem einer kritischen Validierung
unter Berücksichtigung nationaler und internationaler Guidelines unterzogen. Die
Notwendigkeit einer intensiven und strukturierten Validierung ergibt sich aus den
zunehmenden Forderungen nach Maßnahmen zur Qualitätssicherung in der
Veterinärdiagnostik. Diese Maßnahmen müssen im Besonderen von akkreditierten
Untersuchungseinrichtungen erfüllt werden.
Die möglichen Einflüsse der Probenlagerung und der Probenvorbereitung auf einen
quantitativen Nachweis spezifischer Genomfragmente von L. intracellularis in
Kotproben von Schweinen wurden im dritten Abschnitt der vorliegenden
Untersuchung überprüft.
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