Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Ergebnisse
4.1.8 Verdünnungsreihe und Standard
Ein Klon (Kap. 4.1.7) wurde in 250 ml LB-Medium vermehrt, nach 12 Stunden lysiert
und die Plasmide anschließend mit einem spin-kit isoliert. Die spektralphotometrisch
bestimmte Extinktion der 1:10 verdünnten Plasmidlösung im Vergleich zu einem
Leerwert betrug bei einer Wellenlänge von 280 nm 0,0977 (Mittelwert aus 18
Messungen). Daraus folgt, dass die Konzentration der Plasmide im Eluat etwa 1x10 13
pro ml war. Aus dieser Lösung wurde eine Verdünnungsreihe hergestellt und zur
Erstellung der Standardkurve verwendet. Nach vier voneinander getrennten
Untersuchungen in der real-time PCR wurde aus den Mittelwerten die Standardkurve
berechnet.
Die für die Erstellung der Standardkurve verwendeten Lösungen unterschiedlicher
Konzentrationsstufen ergaben linear verteilte Ct-Werte, deren 95 %-
Vertrauensintervall als zweifache Standardabweichung und deren
Wiederholpräzision in % angegeben wurde (Tab. 40).
Tabelle 40: Ct-Mittelwerte der Verdünnungsreihe einer Plasmidlösung, 95 %-
Konzentrationsstufe
(Plasmide / µl
Reaktionseinheit)
Vertrauensintervall und Wiederholpräzision
Ct-
Mittelwert
95 %-
Vertrauensintervall
als Abweichung
vom Mittelwert
101
Präzision als
einfache
Standard-
abweichung
Wiederhol-
präzision (%)
10 7 11,99 +/- 0,28 0,14 98,83
10 6 15,33 +/- 1,10 0,55 96,41
10 5 19,53 +/- 0,82 0,41 97,90
10 4 23,10 +/- 0,56 0,28 98,79
10 3 26,86 +/- 0,70 0,35 98,79
10 2 28,94 +/- 2,14 1,07 96,30
10 1 33,84 +/- 1,10 0,55 98,37
10 0 36,83 +/- 1,16 0,58 98,43
10 -1 37,19 +/- 0,66 0,33 99,11