Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Diskussion
einfachen Standardabweichung der jeweiligen Konzentrationsstufe liegen. Die
maximale Standardabweichung betrug jeweils 0,37 vom mittleren Ct-Wert. Daraus
folgt, dass die Wiederholpräzision einen Wert von mindestens 95,8 % erreicht. Da
die Wiederholpräzision immer größer als 95 % und somit sicher innerhalb der
beschriebenen Grenzen lag, ist die Präzision bei Wiederholungsuntersuchung
gegeben.
Die Vergleichspräzision wurde an Verdünnungsreihen der Plasmidlösung und an
Proben natürlich infizierter Schweine bestimmt. Um die Bedingungen für den Test
zufällig zu variieren (ANON. 1998a), wurden die Proben an unterschiedlichen Tagen
von insgesamt drei verschiedenen Untersuchern bearbeitet und analysiert. Die
Untersuchung der Plasmidverdünnungen führte zu Ergebnissen, die mit einer
relativen Standardabweichung zwischen 0,49 und 2,6 %, immer „präzise“ waren. Die
Quantifizierung spezifischer Genomfragmente von L. intracellularis in Proben
natürlich infizierter Schweine ergab eine Streuung der Messwerte, die innerhalb der
einfachen Standardabweichung (0,39) lag. Lediglich bei zwei Proben lag je ein Wert
außerhalb der einfachen, jedoch innerhalb der zweifachen Standardabweichung. Für
diese lag die Vergleichspräzision bei 76,3 % und 82,1 %, wobei eine erhöhte relative
Standardabweichung in einer Probe mit einer Quantität von etwa 10 2 GE / µl
Reaktionsvolumen festgestellt wurde. Die Betrachtung der Standardkurve lässt für
Werte von ≤10 2 GE / µl Reaktionsvolumen eine höhere Standardabweichung
erwarten, so dass die Ergebnisse für diese Konzentrationsstufen durchaus als
präzise beurteilt werden dürfen. Ergebnisse mit einer relativen Standardabweichung
von bis zu 20 % werden auch in internationalen Richtlinien noch als präzise
bezeichnet, wobei dort eine erst eine relative Standardabweichung von >30 % als
überhöht bezeichnet wird (ANON. 2004a).
Zusammenfassend kann festgestellt werden, dass die Ergebnisse dieser real-time
PCR sowohl unter gleichen wie auch unter variablen Bedingungen sowohl
wiederholbar als auch vergleichbar und damit präzise sind.
5.1.6 Interne Positivkontrolle und Inhibitoren
Zur Qualititätssicherung in der PCR-Diagnostik muss, entsprechend einem Leitfaden
der AKS, eine externe oder interne Amplifikationskontrolle oder eine Entfernung von
129