Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Diskussion
5.2 Verteilung von L. intracellularis in Kotproben
Die Verteilung von L. intracellularis in einer Probenmatrix war bis heute nicht
untersucht. Für andere Erreger (z.B. Salmonella spp.) sind ungleiche Verteilungen
beschrieben, was bei der Untersuchung entsprechend berücksichtigt werden muss.
Da eine gleichmäßige Verteilung des Erregers in der Probenmatrix und/oder ein
geeignetes Verfahren zur Homogenisierung die Grundlage für eine quantitative
Bestimmung sind, wurden zwei Verfahren zur Homogenisierung von Kotproben
überprüft.
Im ersten Protokoll wurden native Kotproben eine Minute lang mechanisch gemischt,
während die Proben im zweiten Protokoll mit einer Flüssigkeit vermengt wurden, um
eine bessere Verteilung der Bakterien in der sehr inhomogenen und hoch viskösen
Matrix zu erreichen. In wiederholten Untersuchungen derselben Proben konnten
immer die gleichen Ergebnisse erzielt werden, die ermittelte Menge von GE lag
jedoch unterhalb der Menge, die bei einfacher Homogenisierung naiver Kotproben
gemessen wurden. Diese Tatsache lässt auf einen Verdünnungseffekt durch die
Zugabe von Flüssigkeit schließen, der die Probenqualität nicht signifikant verbessert.
Die Homogenisierung naiver Proben allein durch intensives Rühren, führte ebenfalls
zu einheitlichen Ergebnissen in den Wiederholungsuntersuchungen.
Abschließend kann die Verteilung von L. intracellularis in Kotproben zwar immer
noch nicht als gleichmäßig angenommen werden, es konnte aber gezeigt werden,
dass eine manuelle Homogenisierung ausreicht, um anschließend an einer
repräsentativen Teilprobe den Gehalt spezifischer Genomfragmente von L.
intracellularis in der Probe zu bestimmen.
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