Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Material und Methoden
Tabelle 19: Protokoll der PCR zur Verifikation von Proben natürlich infizierter
Schweine vor der Sequenzierung
DNA-template: Proben natürlich infizierter Schweine
Aufgereinigt mit: QIAamp ® DNA Stool Mini Kit
Reaktionsmix:
12,5 µl TaqMan ® universal PCR Master Mix 2x
10 µl Primer- Mix
2,5 µl template-DNA
PCR-Gerät: 7500 Real-Time PCR System
PCR-Protokoll: s. Tabelle 7
Modifikationen: Zyklen: 40 statt 45
Ergebnisauswertung: Wellenlänge ~ 520 nm für FAM
Tabelle 20: Protokoll der PCR an DNA aus Proben natürlich infizierter Schweine zur
Herstellung von PCR-Produkten für die Sequenzierung
DNA-template: Proben natürlich infizierter Schweine
Aufgereinigt mit: QIAamp ® DNA Stool Mini Kit
Reaktionsmix:
12,5 µl TaqMan ® universal PCR Master Mix 2x
2,5 µl Primer Li-Ubi F (5 pmol/ µl)
2,5 µl Primer Li-Ubi-R (5 pmol/ µl)
5 µl Wasser
2,5 µl template-DNA
PCR-Gerät: 7500 Real-Time PCR System
PCR-Protokoll: s. Tabelle 7
Modifikationen: Zyklen: 40 statt 45
Ergebnisauswertung: Spektralphotometrische Bestimmung des DNA-
Gehaltes
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