Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

5.4 Schlussfolgerungen
Diskussion
Die in dieser Arbeit entwickelte real-time PCR zum Nachweis spezifischer
Genomfragmente von L. intracellularis wurde in Anlehnung an nationale und
internationale Richtlinien umfangreich validiert. Neben der theoretischen und
praktischen Überprüfung der analytischen Spezifität von Primer und Sonde, wurde
die diagnostische Spezifität und Sensitivität an 300 Proben mit bekanntem Status
überprüft. Die real-time PCR ist deutlich sensitiver als die zum Vergleich verwendete
multiplex-PCR (NATHUES 2007). Ein „Goldstandard“ für den Nachweis von L.
intracellularis ist derzeit nicht definiert; die real-time PCR würde sich aber aufgrund
ihrer Spezifität und Sensitivität durchaus dafür eignen.
Die Güteparameter „Präzision“, „Nachweis- und Quantifizierungsgrenzen“,
„Robustheit“ und „Wiederfindung“ haben die Erwartungen an eine Methode zur
Erregerquantifizierung an Kotproben als Ausgangsmaterial deutlich übertroffen.
Eine Inhibition, die wiederkehrend im Zusammenhang mit PCR an Kotproben in der
Literatur diskutiert wird, konnte in keiner der Untersuchungen festgestellt werden.
Aus diesem Grund wird das Verfahren zur DNA-Isolierung und Entfernung von
Inhibitoren aus der Probenmatrix als sehr gut beurteilt.
Im Gegensatz zu Untersuchungen im Rahmen standardisierter wissenschaftlicher
Studien wird Probenmaterial im Rahmen der Routinediagnostik häufig nach
Lagerung von unbekannter Dauer und nicht selten auch nach ungekühltem Transport
untersucht. Die Tatsache, dass Temperatur und Dauer der Probenlagerung keinen
Einfluss auf das Ergebnis nehmen, lässt den Schluß zu, dass sich der Test auch zur
Untersuchung von Probenmaterial in der Routinediagnostik eignet.
Die real-time PCR ermöglicht in epidemiologischen Studien eine genauere
Charakterisierung der Erregermenge in Proben. Dadurch können Aussagen
bezüglich des Verlaufs der Infektion mit L. intracellularis im Bestand zukünftig
präzisiert werden.
Schlussendlich kann die real-time PCR, falls eine enge Korrelation zwischen
pathologischer Veränderungen im Tier und ausgeschiedener Erregermenge besteht,
die pathologische Untersuchung von Schweinen in gewissem Maße ersetzen resp.
die Zahl zu untersuchender Tiere reduzieren.
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