Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Literaturübersicht
(KROLL et al. 2005a). Sensitivität und Spezifität der Methode werden im Allgemeinen
als hoch eingeschätzt. In einer vergleichenden Untersuchung konnte für den
indirekten IFT an Darmgewebe eine hohe Sensitivität (89 %) und eine hohe Spezifität
(97 %) im Vergleich zur PCR festgestellt werden. Die Übereinstimmung der
Ergebnisse von IFT und PCR wurde mit almost perfect beurteilt (kappa 0,82)
(HUERTA et al. 2003). In einer anderen Untersuchung zum Vergleich von IFT an
Kotausstrichen und PCR an Kotproben derselben Tiere wurden mittels PCR 8 %
mehr Tiere als positiv erkannt. Die Sensitivität wurde mit 56,5 % angegeben. Darüber
hinaus wurde vom Autor die hohe Belastung des Untersuchers bei der Auswertung
von IFTs als Nachteil der Methode angeführt (BONITZ 2001).
Die PCR ist eine sensitive, sehr spezifische und schnelle molekularbiologische
Nachweismethode. Sie ist besonders für Erreger geeignet, die nur schwer
anzuzüchten sind. In 1993 wurde eine nested-PCR zum Nachweis spezifischer
Genomfragmente von L. intracellularis entwickelt. Die untere Nachweisgrenze betrug
10 Erregern aus gereinigter Mukosa und 1000 Erregern pro Gramm Kot. Die
Aufreinigung der DNA erfolgte durch einfache Waschschritte (JONES et al. 1993). Es
wurden weitere PCR-Assays etabliert, bei denen durch zusätzliche Schritte in der
DNA-Aufreinigung, Kochen und Verdünnen, der Einfluss von Inhibitoren aus Gewebe
und Kot reduziert werden sollte (MCORIST et al. 1994). Die Sensitivität der PCR
wurde zunächst von vielen Autoren als relativ niedrig eingeschätzt, weil diese
Inhibitoren zu falsch negativen Ergebnissen führen können. In einer Studie mit PCR-
Untersuchungen an Kotproben waren nur 38 % der experimentell infizierten Tiere bis
24 Tage p.i. positiv; im Gegensatz dazu erzielte eine PCR an Ileumgewebe zu 100 %
positive Ergebnisse. Das Vorkommen von Inhibitoren im Kot und die intermittierende
Ausscheidung des Erregers wurden als Grund für diese Diskrepanz diskutiert
(KNITTEL et al. 1997). Durch die Entwicklung von Substanzen, die Inhibitoren aus
Kot während der DNA-Extraktion weitestgehend durch Bindung entfernen können,
und weiterentwickelte Extraktionsprotokolle ist die Sensitivität der PCR deutlich
gestiegen. Die Sensitivität der PCR aus Schleimhautproben und Kot betrug in
neueren Untersuchungen 94,1 % und 88,2 % (SUH et al. 2000). Vorteile der PCR
sind die hohe Sensitivität und die sichere Durchführbarkeit, die auch bei hohem
Probendurchsatz gewährleistet ist. Darüber hinaus ist der Nachweis spezifischer
Genomfragmente von L. intracellularis in Kot eine Methode, die eine intra vitam
Diagnostik ermöglicht (SUH et al. 2000). In den vergangenen Jahren wurde die PCR
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