Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Material und Methoden
Tabelle 11: Protokoll der PCR (II) zur Optimierung der Primer-Konzentration
DNA-template: Lawsonia intracellularis MS B3903
Aufgereinigt mit: DNeasy ® Blood & Tissue Kit
Reaktionsmix:
12,5 µl QuantiTect ® SYBR ® Green PCR Master Mix 2x
x µl Primer Li-Ubi F
x µl Primer Li-Ubi-R
Wasser ad 22,5 µl Reaktionsvolumen
2,5 µl template-DNA
PCR-Gerät: 7500 Real-Time PCR System
PCR-Protokoll: s. Tabelle 7
Modifikationen: first denaturation: 900 statt 600 Sekunden
Ergebnisauswertung: Wellenlänge ~ 520 nm für SYBR ® Green,
Schmelzkurvenanalyse
Tabelle 12: Protokoll der PCR (III) zur Optimierung der Primer-Konzentration
DNA-template: Lawsonia intracellularis MS B3903
Aufgereinigt mit: DNeasy ® Blood & Tissue Kit
Reaktionsmix:
12,5 µl 12,5 µl QuantiTect ® SYBR ® Green PCR Master
Mix 2x
x µl Primer Li-Ubi F
x µl Primer Li-Ubi-R
Wasser ad 22,5 µl Reaktionsvolumen
2,5 µl template-DNA
PCR-Gerät: 7500 Real-Time PCR System
PCR-Protokoll: s. Tabelle 7
Modifikationen: first denaturation: 900 statt 600 Sekunden
Ergebnisauswertung: Wellenlänge ~ 520 nm für SYBR ® Green
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