Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

Material und Methoden
Tabelle 21: Protokoll der Gradienten-PCR
DNA-template: Lawsonia intracellularis MS B3903
Proben natrülich infizierter Schweine
Aufgereinigt mit: DNeasy ® Blood & Tissue Kit
Reaktionsmix:
QIAamp ® DNA Stool Mini Kit
12,5 µl ReadyMix Taq PCR Reaction Mix 2x
2,5 µl Primer Ubi-Clon-lang-F (5 pmol/ µl)
2,5 µl Primer Ubi-Clon-lang-R (5 pmol/ µl)
5 µl Wasser
2,5 µl template-DNA
PCR-Gerät: Thermocycler
PCR-Protokoll: s. Tabelle 8
Modifikationen: keine
Ergebnisauswertung: Gelelektrophorese (4 %iges Multi-Agarose-Gel,
Laufzeit 1,5 h); DNA-Leiter
Tabelle 22: Protokoll der PCR zur Herstellung von PCR-Produkt zum Klonieren
DNA-template:
Aufgereinigt mit:
Reaktionsmix:
Lawsonia intracellularis MS B3903
Proben natürlich infizierter Schweine
DNeasy ® Blood & Tissue Kit
QIAamp ® DNA Stool Mini Kit
12,5 µl ReadyMix Taq PCR Reaction Mix 2x
2,5 µl Primer Ubi-Clon-lang-F (5 pmol/ µl)
2,5 µl Primer Ubi-Clon-lang-R (5 pmol/ µl)
5 µl Wasser
2,5 µl template-DNA
PCR-Gerät: Thermocycler
PCR-Protokoll: s. Tabelle 8
Modifikationen: annealing-Temperatur: 61,6 °C
Ergebnisauswertung: Spektralphotometrische Bestimmung des DNA-
Gehaltes
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