Quantitativer Nachweis von Lawsonia intracellularis mittels real-time ...

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Literaturübersicht Der Erreger, L. intracellularis, wurde zunächst aufgrund seiner morphologischen Ähnlichkeit im Fluoreszenzlicht zu den Bakterien der Spezies Campylobacter als Campylobacter sputorum subspecies (ssp.) mucosalis bezeichnet (LAWSON u. ROWLAND 1974). Nachdem festgestellt wurde, dass der Erreger der proliferativen Enteropathie des Schweines sich antigenetisch von Campylobacter ssp. unterscheidet und nur dieser Erreger in affektierten Darmzellen nachgewiesen werden konnte, wurde mit der Bezeichnung campylobacter-like organism (CLO) die Differenz zu den derzeit bekannten Campylobacter ssp. deutlich gemacht (MCORIST et al. 1987). Die Zugehörigkeit des Erregers zu den Desulfovibrionaceae und der heute offiziell geführte Name Lawsonia intracellularis wurde 1995 veröffentlicht (MCORIST et al. 1995a). Die kulturelle Anzucht von L. intracellularis ist sehr anspruchsvoll. Da der Erreger obligat intrazellulär wächst, ist eine Vermehrung nur in zellhaltigen Medien möglich. Es wird eine mikroaerophile Atmosphäre (8 – 15 % Sauerstoff) empfohlen, wobei 8 % Sauerstoff als optimal erachtet werden (MCORIST et al. 1995a). Die Anzucht von L. intracellularis aus infizierter Darmmukosa ist auf verschiedenen Zelllinien möglich, von denen sich Dünndarmzellen von Ratten (intestinal epithelium cells 18, IEC-18) als Monolayer besonders gut eignen (LAWSON et al. 1993). L. intracellularis kommt nicht nur in den Enterozyten beim Schwein vor. Der Erreger konnte mittels PCR und Immunfluoreszenztest (IFT) auch in Tonsillen von Schweinen nachgewiesen werden. Fehlende Anzeichen einer Bakterienproliferation in den Tonsillen ließen die Autoren vermuten, dass es sich um eine lokale Retention des Erregers mit folgender Inaktivierung durch Makrophagen handelt (JENSEN et al. 2000). Die Tenazität von L. intracellularis in der Umwelt ist relativ groß. Eine Vermehrungsfähigkeit konnte noch nach ein bis zwei Wochen außerhalb des Wirtes bei 5 °C Umgebungstemperatur festgestellt werden (M CORIST u. GEBHART 1999a). Die Fähigkeit von L. intracellularis den Darm zu besiedeln bleibt im Kot bis zu zwei Wochen bei einer Lagertemperatur zwischen 5 °C und 15 °C erhalten. Mit erregerhaltigem Kot, der über fünf Wochen gelagert wurde, konnte nach Inokulation von Schweinen keine Infektion mehr ausgelöst werden. 5
Literaturübersicht Desinfektionsmittel mit Komponenten auf der Basis von quartären Ammoniumgruppen oder Jod haben eine bakterizide Wirkung auf L. intracellularis (COLLINS et al. 2000). 6
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Material und Methoden dem Vortex ge
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Material und Methoden Temperaturgra
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Material und Methoden 3.2.5 Optimie
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Material und Methoden Der Reaktions
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3.2.10 Sequenzierung Material und M
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4 Ergebnisse 4.1 Etablierung und Va
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Ergebnisse Arcanobacterium pyogenes
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4.1.6 Sequenzierung Ergebnisse Die
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Ergebnisse hellblaue sowie blaue Ko
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Ergebnisse Mit einer Konzentration
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4.1.10 Vergleichspräzision Ergebni
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Ergebnisse Tabelle 41: diagnostisch
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Ergebnisse entspricht einer Wiederf
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4.1.15 Messunsicherheit Ergebnisse
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Ergebnisse Tabelle 44: Ergebnisse d
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Quantität GE / µl Reaktionsvolume
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5 Diskussion Diskussion Die vorlieg
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Diskussion gebildet werden. Verglei
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Diskussion Bindung der Primer und d
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Diskussion Milliliter mit 50 µl) u
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Diskussion Die Effizienz einer Ampl
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Diskussion Inhibitoren während der
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Diskussion Proben spezifische Genom
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5.4 Schlussfolgerungen Diskussion D
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Zusammenfassung auch zur Erstellung
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Summary genome equivalent per react
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ANONYM (1998b): Literaturverzeichni
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Literaturverzeichnis BOESEN, H.T.,
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Literaturverzeichnis CORZO, C.A., R
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Literaturverzeichnis GROSS-BELLARD,
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Literaturverzeichnis HOLLAND, P.M.,
Seite 165 und 166:
Literaturverzeichnis JORDAN, D.M.,
Seite 167 und 168:
Literaturverzeichnis KUBISTA, M., J
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Literaturverzeichnis LINDECRONA, R.
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Literaturverzeichnis MARSTELLER, T.
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Literaturverzeichnis MCORIST, S., A
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Literaturverzeichnis NIEDERHAUSER,
Seite 177 und 178:
SAIF, L.J., u. R.D. WESLEY (1999):
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Literaturverzeichnis SUH, D.-K., S.
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Literaturverzeichnis WIDJOJOATMODJO
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Anhang 7 12.12 12.1066667 7 12.11 6
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Anhang Tabelle 47: Quantität von G
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Anhang Tabelle 51: Ergebnisse der q
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Danksagung Ich danke Frau Priv.- Do
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