Mechanistische Analysen zu Krankheits-korrelierten SNPs in ...

5 Ergebnisse
A
[ 32 P]-miR-195 guide
[ 32 P]-miR-135a guide
MRAS 3'-UTR C
MRAS 3'-UTR U
-
MRAS 3'-UTR C
MRAS 3'-UTR U
-
0 10 30 60 120 0 10 30 60 120 0 120 t in s
0 10 30 60 120 0 10 30 60 120 0 120
Komplex
miRNA
B
% Komplex
12
10
8
6
4
4,2
3,2
7,4
5,0
9,9
7,6
MRAS 3′-UTR C
MRAS 3′-UTR U
2
0
0,9
1,6
0,8 1,3
0 10 s 30 s 60 s 120 s
miR-195 guide
Abbildung 5.29: Untersuchung der zeitabhängigen Komplexbildung der MRAS 3’-UTR-Varianten
mit miR-195 und miR-135a. MRAS 3’-UTR C bzw. U in vitro Transkripte (5 nM) wurden mit miR-195
bzw. miR-135a guide Strang (0,5 nM) in Anwesenheit von 10 mM CTAB für 0-120 s bei 37°C inkubiert.
Als Negativkontrolle diente jeweils ein Ansatz ohne in vitro Transkript. Die Reaktionen wurden
durch Zugabe von Stopp-Puffer und Einfrieren in flüssigem Stickstoff beendet und die Proben bei
4 °C und 150 V auf einem 8 %-igen, nativen PAA-Gel aufgetrennt. (A) links sind die Ergebnisse des
miR-195 und rechts die des miR-135a Annealings gezeigt. (B) Quantifizierung der MRAS-miR-195
Komplexbildung. Dargestellt sind die Mittelwerte und Standardabweichungen zweier unabhängiger
Experimente.
Die zu jedem Zeitpunkt stärkere Komplexbildung der miR-195 mit der MRAS C-Variante
spiegelt sich auch in den berechneten Ratenkonstanten (siehe Tab. 5.13) wider.
Tabelle 5.13: Ratenkonstanten des Annealings von MRAS 3’-UTR und miR-195 in Anwesenheit von
CTAB.
miRNA in vitro Transkript k (M -1 s -1 )
miR-195 MRAS 3’-UTR C 1,8·10 6 ± 8,3·10 3
MRAS 3’-UTR U 1,6·10 6 ± 8,8·10 4
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