Mechanistische Analysen zu Krankheits-korrelierten SNPs in ...

4 Methoden
Tabelle 4.10: Übersicht der Reaktionsansätze des Annealings mit anschließendem Strukturprobing.
In vier verschiedenen Reaktionsansätzen wurde der Einfluss der Bindung von miR-224 an die TCF21
in vitro Transkripte in An- und Abwesenheit von CTAB auf die Pb 2+ -induzierte RNA-Spaltung analysiert.
Reaktion IVT miR-224 CTAB
1 1 pmol 10 pmol 10 mM
2 1 pmol 10 pmol -
3 1 pmol - 10 mM
4 1 pmol - -
4.3 Zellbiologische Methoden
4.3.1 Kultivierung von Säugerzellen
Die folgende Übersicht zeigt die während dieser Arbeit verwendeten Zelllinien und deren
Kulturmedium sowie den im Vollmedium enthaltenen Anteil an FKS.
Tabelle 4.11: Übersicht verwendeter Zelllinien.
Zelllinie Ursprung Vollmedium
HeLa Zervixkarzinom DMEM, 10 % FKS
Hec1A Endometriumepithelzellkarzinom RPMI, 10 % FKS
MCF-7 Brustzellkarzinom DMEM, 5 % FKS
Die Säugerzellen wurden bei 37 °C und 5 % CO 2 kultiviert und alle 2-3 Tage passagiert.
Dazu wurde das Kulturmedium abgenommen, der Zellrasen einmal mit PBS gewaschen, die
Zellen mit Trypsin/EDTA benetzt und bis zum Ablösen bei 37 °C inkubiert. Nach Zugabe
von Vollmedium wurden die Zellen für 3 min bei 1.000 rpm zentrifugiert, anschließend in
Vollmedium resuspendiert und neu ausgebracht.
Zur Aussaat von Zellen für Transfektionsexperimente wurde die Zellzahl mittels Neubauer
Zählkammer bestimmt und anschließend die gewünschte Anzahl an Zellen in Vollmedium in
den für das jeweilige Experiment vorgesehenen Zellkultur-Platten ausgebracht (12, 24 oder
96 well).
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