Mechanistische Analysen zu Krankheits-korrelierten SNPs in ...

A.1 PCR-Details
Tabelle A.12: Details der TCF21 200er T7-PCR
PCR-Ansatz f.c. PCR-Programm
pmirGLO TCF21 3’-UTR C/G 75 ng 1. 1 × Denaturierung 98 °C 180 s
5×Phusion HF Puffer 1× 2. 5 × Denaturierung 98 °C 10 s
dNTPs 0,375 mM Annealing 68 °C 20 s
TCF21 200 T7 FW 0,25 µM Extension 72 °C 20 s
TCF21 200 RV 0,25 µM 3. 30 × Denaturierung 98 °C 10 s
Phusion Pol 1,2 u Annealing/Extension 72 °C 30 s
4. 1 × finale Extension 72 °C 450 s
f.v. 60 µl
A.1.4 Kolonie-PCRs
Tabelle A.13: Details zur Kolonie-PCR von AGTR1, ESR1 und MRAS. PCR-Produkte: AGTR1 1150
bp, ESR1 1434 bp, MRAS 1469 bp
PCR-Ansatz f.c. PCR-Programm
10×Taq Puffer 1× 1. 1 × Denaturierung 95°C 180 s
dNTPs 0,8 mM 2. 35 × Denaturierung 95 °C 15 s
FW-Primer 1 0,5 µM Annealing 55 2 bzw. 57 3 °C 30 s
RV-Primer 4 0,5 µM Extension 72 °C 105 s
Taq Pol 400 u 3. 1 × finale Extension 72 °C 300 s
f.v. 20 µl
1 AGTR1: AGTR1 Seq FW, ESR1: ESR1 Seq FW, MRAS: pmirGLO FW
2 AGTR1 und ESR1
3 MRAS
4 AGTR1 und ESR1: pMIR Luci RV, MRAS: MRAS Seq RV
Tabelle A.14: Details zur Kolonie-PCR von TCF21. PCR-Produkt: 400 bp
PCR-Ansatz f.c. PCR-Programm
10×Taq Puffer 1× 1. 1 × Denaturierung 95 °C 180 s
dNTPs 0,53 mM 2. 35 × Denaturierung 95 °C 15 s
pmirGLO FW 0,5 µM Annealing 57 °C 30 s
TCF21 Kolonie PCR RV 0,5 µM Extension 72 °C 45 s
Taq Pol 300 u 3. 1 × finale Extension 72 °C 300 s
f.v. 15 µl
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