Mechanistische Analysen zu Krankheits-korrelierten SNPs in ...

5 Ergebnisse
A
[ 32 P]-siAGTR1 A guide
[ 32 P]-siAGTR1 C guide
AGTR1 3'-UTR A AGTR1 3'-UTR C
-
- AGTR1 3'-UTR A AGTR1 3'-UTR C
0 3,33 10 40 0 3,33 10 40 0 3,33 10 40
t in min
Komplex
0 3,33 10 40 0 3,33 10 40 0 3,33 10 40
ss siRNA
B
70
63
% Komplex
60
50
40
30
20
10
0
53 51
52
35
23 24
23
17
9 10
10
1 2
2 3
0 3,33 min 10 min 40 min 0 3,33 min 10 min 40 min
siAGTR1 A
siAGTR1 C
AGTR1 3'-UTR A
AGTR1 3'-UTR C
Abbildung 5.11: Komplexbildung aus AGTR1 3’-UTR und siAGTR1. AGTR1 3’-UTR A bzw. C in
vitro Transkripte (50 nM) wurden mit siAGTR1 A bzw. C guide Strang (0,5 nM) ohne CTAB für 0-40
min bei 37 °C inkubiert. Als Negativkontrolle diente jeweils ein Ansatz ohne in vitro Transkripte. Die
Reaktionen wurden durch Zugabe von Stopp-Puffer und Einfrieren in flüssigem Stickstoff beendet
und die Proben bei 4 °C und 150 V auf einem 8 %-igen nativen PAA-Gel aufgetrennt. Dargestellt sind
die Mittelwerte und Standardabweichungen dreier unabhängiger Experimente.
Tabelle 5.4: Ratenkonstanten des AGTR1 siRNA-Annealings.
siRNA in vitro Transkript k (M -1 s -1 )
siAGTR1 A AGTR1 3’-UTR A 3,9·10 4 ± 1,3·10 3
AGTR1 3’-UTR C 3,7·10 4 ± 2,3·10 3
siAGTR1 C AGTR1 3’-UTR A 3,7·10 4 ± 1,2·10 3
AGTR1 3’-UTR C 4,5·10 4 ± 8,3·10 3
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