Mechanistische Analysen zu Krankheits-korrelierten SNPs in ...

5 Ergebnisse
Die thermodynamischen Parameter weisen auf keine signifikanten Unterschiede in der
Gibbs’schen Freien Aktivierungsenergie ∆G ‡ und der Aktivierungsentropie ∆S ‡ hin. Detaillierterer
Aussagen zur Struktur-Funktions-Beziehung bedürfen weiteren biochemischen
Analysen.
5.8.9 Annealing von miRNAs an TCF21 mit anschließendem Strukturprobing
Anhand der Ergebnisse der vorangegangenen TCF21-Analysen konnte experimentell gezeigt
werden, dass die TCF21-Varianten zum einen strukturelle Unterschiede (siehe 5.8.7)
und zum anderen ein differentielles Annealing an die miR-224 aufweisen. In Folge dessen
sollte untersucht werden, ob die Bindung der miR-224 an das TCF21 C bzw. G in vitro
Transkript einen Einfluss auf das Strukturprobing hat. Dazu erfolgte eine Inkubation der kurzen
TCF21 in vitro Transkripte mit dem miR-224 guide Strang und anschließend eine Pb 2+ -
vermittelte RNA-Hydrolyse. Zur vergleichenden Analyse wurden je TCF21 in vitro Transkript
vier unterschiedliche Reaktionen parallel durchgeführt (mit bzw. ohne miR-224 sowie mit
bzw. ohne CTAB, siehe auch Tab. 4.10) und die Ergebnisse in der Abb. 5.56 dargestellt.
Die Ergebnisse für das TCF21 C in vitro Transkript (Abb.-Teil A) weisen darauf hin, dass
die miR-224 Bindestelle sowohl in An- als auch Abwesenheit der miR-224 die geringste
Zugänglichkeit für eine Pb 2+ -induzierte Hydrolyse aufweist. Auffallend ist die gesteigerte
RNA-Spaltung der die miR-224 Bindestelle unmittelbar flankierenden Bereiche sowie eine
verminderte Spaltung im seed Bereich in Anwesenheit von CTAB und miR-224. Das lässt
vermuten, dass eine durch CTAB verstärkte Bindung der miR-224 an das TCF21 C in vitro
Transkript die Zugänglichkeit für Pb 2+ in diesen Bereichen verändert.
Die TCF21 G-Variante dagegen weist deutlich stärkere Spaltprodukte sowohl in An- als
auch Abwesenheit der miR-224 bzw. von CTAB innerhalb der miR-224 Bindestelle auf. Diese
sind in Anwesenheit von CTAB und miR-224 deutlich schwächer ausgeprägt. Die Bereiche
des TCF21 G-Transkripts, die die miR-224 Bindestelle unmittelbar flankieren, weisen
ebenfalls in Anwesenheit von CTAB und der miR-224 eine gesteigerte Hydrolyse auf.
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