Mechanistische Analysen zu Krankheits-korrelierten SNPs in ...
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3.5 Nukle<strong>in</strong>säuren<br />
cDNA-Synthese-Primer<br />
Zur cDNA-Synthese wurden random Hexamer oder oligo-dT Primer, die Bestandteile des<br />
RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kits s<strong>in</strong>d, e<strong>in</strong>gesetzt.<br />
qRT-PCR Primer<br />
Tabelle 3.13: qRT-PCR-Primer<br />
Name Sequenz (5’ → 3’) mRNA-Position<br />
TCF21 RT FW CCTTGGAGTT TGGTACCTGG 818-837<br />
TCF21 RT RV C GCAAATAGAC AGGTGGATGA AG 1058-1079<br />
TCF21 RT RV G GCAAATAGAC AGGTGGATGA AC 1058-1079<br />
TCF21 RT RV C MM20G GCAAATAGAC AGGTGGATGG AG 1058-1079<br />
TCF21 RT RV G MM20G GCAAATAGAC AGGTGGATGG AC 1058-1079<br />
GAPDH FW AACAGCGACA CCCACTCCTC 1033-1052<br />
GAPDH RV GGAGGGGAGA TTCAGTGTGG T 1270-1290<br />
3.5.5 Plasmide<br />
Tabelle 3.14: Plasmide<br />
Name Herkunft Hersteller<br />
pMIR-REPORT Luciferase<br />
während dieser Arbeit<br />
kommerziell erworben<br />
Ambion ® / Applied<br />
Biosystems<br />
pmirGLO Dual-Luciferase<br />
<strong>zu</strong>r Verfügung gestellt von Promega<br />
Animesh Bhattacharya<br />
pRL-CMV Renilla Luciferase Control IMM Laborbestand Promega<br />
Humane Prostata Matchmaker cDNA- IMM Laborbestand Clontech<br />
Bibliothek<br />
pGEM3Z3-ICAM-1 IMM Laborbestand Promega<br />
Der pMIR-REPORT und der pmirGLO Vektor wurden <strong>zu</strong>r Klonierung der Ziel-Gen Reporterkonstrukte<br />
verwendet. Beide Vektoren s<strong>in</strong>d dadurch gekennzeichnet, dass sich deren Multiple<br />
Clon<strong>in</strong>g Site (MCS) h<strong>in</strong>ter der für die firefly Luciferase (FL) kodierenden Sequenz anschließt.<br />
Steht der e<strong>in</strong>gefügte Sequenzabschnitt unter e<strong>in</strong>er miRNA- bzw. siRNA-vermittelten<br />
Regulation, so führt dies <strong>zu</strong> e<strong>in</strong>er Abnahme der firefly Luciferase Reporter-Aktivität. Als<br />
Transfektions-Kontrolle wurden <strong>zu</strong>sätzlich Renilla Luciferase (RL) Reporter e<strong>in</strong>gesetzt. Bei<br />
der Transfektion des pMIR-REPORT Vektors wurde e<strong>in</strong> <strong>zu</strong>sätzliches Plasmid ko-transfiziert,<br />
das für die Renilla Luciferase kodiert (pRL-CMV). Bei E<strong>in</strong>satz des pmirGLO Vektors war dies<br />
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