Mechanistische Analysen zu Krankheits-korrelierten SNPs in ...

A Anhang
Tabelle A.3: PCR-Details zur Amplifikation der MRAS 3’-UTR
PCR-Ansatz f.c. PCR-Programm
MRAS PCR Fragment 1 10 ng 1. 1 × Denaturierung 98 °C 180 s
MRAS PCR Fragment 2 20 ng 2. 3 × Denaturierung 98 °C 10 s
5×Phusion HF Puffer 1× Annealing 63 °C 20 s
dNTPs 0,825 mM Extension 72 °C 132 s
MRAS FW SacI 0,25 µM 3. 32 × Denaturierung 98 °C 10 s
MRAS RV SalI 0,25 µM Annealing/Extension 72 °C 152 s
Phusion Pol 1 u 4. 1 × finale Extension 72 °C 450 s
f.v. 50 µl
Tabelle A.4: PCR-Details zur Amplifikation der TCF21 3’-UTR
PCR-Ansatz f.c. PCR-Programm
TCF21 PCR Fragment 1 10 ng 1. 1 × Denaturierung 98 °C 180 s
TCF21 PCR Fragment 2 10 ng 2. 10 × Denaturierung 98 °C 10 s
5×Phusion HF Puffer 1× Annealing 68 °C 20 s
dNTPs 0,96 mM Extension 72 °C 90 s
TCF21 FW DraI 0,39 µM 3. 25 × Denaturierung 98 °C 10 s
TCF21 RV SalI 0,39 µM Annealing/Extension 72 °C 110 s
Phusion Pol 1 u finale Extension 72 °C 450 s
f.v. 50 µl
A.1.2 Mutagenese-PCRs
Tabelle A.5: Übersicht verwendeter Templates und Primer zur Mutagenese-PCR
AGTR1 Template: pMIR-Luci AGTR1 3’-UTR A (17,47 ng/µl)
Primer (FW,M,RV): AGTR1 FW SpeI 2,AGTR1 FW SNP,AGTR1 RV SacI 2
ESR1 Template: pMIR-Luci ESR1 3’-UTR C (18,33 ng/µl)
Primer (FW,M,RV): ESR1 FW SpeI,ESR1 FW SNP,ESR1 RV MluI
MRAS Template: pmirGLO MRAS 3’-UTR C (25,19 ng/µl)
Primer (FW,M,RV): MRAS FW SacI,MRAS FW SNP,MRAS RV SalI
TCF21 Template: pmirGLO TCF21 3’-UTR C (23,09 ng/µl)
Primer (FW,M,RV): TCF21 FW DraI,TCF21 FW SNP,TCF21 RV SalI
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