Ganzheitliche Untersuchungsmethoden zur Erfassung und Prüfung ...

Validierung der Methoden und Ergebnisse der Vergleichsmessungen 163
und nachfolgende Filtration entfernt. Die Bestimmung erfolgt mit Umkehrphasen-HPLC
(LiChrospher 100 NH 2) und Detektion im UV-Bereich (205 nm).
4.3.1.6.3 Bestimmung freier Aminosäuren in Möhren
Die Bestimmung erfolgt mittels Aminosäurenanalysator nach der VDLUFA-Methodensammlung.
Die homogenisierte und feinzerkleinerte Probe (15 g) wird mit Trichloressigsäure (12 %)
extrahiert. Störende Begleitstoffe werden dabei durch Fällung mit Trichloressigsäure (48 % und
anschließende Filtration) entfernt. Die Bestimmung erfolgt ionenchromatographisch (Pharmacia
LKB) mit Ninhydrin-Nachsäulenderivatisierung und UV-Detektion (570 nm bzw. 440 nm).
4.3.1.6.4 Bestimmung proteinogener Aminosäuren in Weizen nach Hydrolyse
a) Die Bestimmung der proteinogenen Aminosäuren mit Ausnahme von Cystein, Methionin
und Tryptophan erfolgt nach saurer Hydrolyse mittels HPLC bzw. Aminosäurenanalysator
nach der VDLUFA-Methodensammlung. Die homogenisierte und feinzerkleinerte Probe
(ca. 0,8 g) wird mit 6 N HCl für 24 h bei 110 °C unter Stickstoff im geschlossenen Gefäß
hydrolysiert. Die Bestimmung erfolgt mittels Umkehrphasen-HPLC (HP-Aminoquant;
Hypersil AA ODS; 338 nm) mit Vorsäulenderivatisierung (OPA/FMOC) bzw.
ionenchromatographisch (Pharmacia LKB) mit Ninhydrin-Nachsäulenderivatisierung und
UV-Detektion (570 nm bzw. 440 nm).
b) Die Bestimmung der schwefelhaltigen Aminosäuren Methionin und Cystein erfolgt separat
nach sauerer Hydrolyse mit vorheriger Oxidation mittels HPLC und Aminosäurenanalysator
nach der VDLUFA-Methodensammlung. Dazu wird die homogenisierte und
feinzerkleinerte Probe (0,8 g) unter Eis-Kühlung für 24h mit
Ameisensäure/Wasserstoffperoxid oxidiert. Nach Abbruch der Oxidation mit Natriumsulfit
wird mit 6 N HCl für 24 h bei 110 °C unter Stickstoff im geschlossenen Gefäß hydrolysiert.
Die Bestimmung erfolgt mittels Umkehrphasen-HPLC (HP-Aminoquant; Hypersil AA
ODS; 338 nm) mit Vorsäulenderivatisierung (OPA/FMOC) bzw. ionenchromatographisch
(Pharmacia LKB) mit Ninhydrin-Nachsäulenderivatisierung und UV-Detektion (570 nm
bzw. 440 nm).
c) Die Bestimmung von Tryptophan erfolgt separat nach basischer Hydrolyse mittels HPLC
nach der VDLUFA-Methodensammlung. Dazu wird die homogenisierte und
feinzerkleinerte Probe (ca. 0,8 g) mit 4 N LiOH für 24h bei 110°C unter Stickstoff im
Ganzheitliche Untersuchungsmethoden zur Erfassung und Prüfung der Qualität ökologischer Lebensmittel