Ganzheitliche Untersuchungsmethoden zur Erfassung und Prüfung ...

Validierung der Methoden und Ergebnisse der Vergleichsmessungen 250
4.5.3.4.2 Methoden
Saure Hydrolyse
Da sich bereits in den Vorversuchen am WZW die methanolische Extraktion des gemahlenen
Weizen als nicht geeignet herausstellte, wurden die weiteren Extraktionen nur noch mit der sauren
Hydrolyse durchgeführt. Im Vergleich zu den Vorversuchen wurde aus labortechnischen Gründen
das Probenvolumen erhöht.
Für diese Untersuchungen wurden jeweils 3 g gemahlenen Weizens in eine Schottflasche (50 ml)
eingewogen und 20 ml eines Methanol (Methanol + Standard = 6-Methoxy-Flavon, 0,03 mg / ml) -
Salzsäure-Gemisches (1:1, v:v) zugegeben. Das Gemisch wurde für 30 min. im Ultraschallbad
extrahiert und im Wasserbad 30 min. gekocht. Nach dem Zentrifugieren (10 min., 4000 rpm) wurde
der Überstand (ca. 15 ml) dekantiert, der Rückstand wurde verworfen. Dem Überstand werden 17
ml Ethylacetat zugegeben und das Gemisch ausgeschüttelt. Die obere (methanolisch-wässrige)
Phase wurde abpipettiert und weitere zwei Male mit jeweils 17 ml Ethylacetat ausgeschüttelt. Die
Ethylacetatphasen wurden in einen 50 ml Kolben zusammengefasst und in einem
Rotationsverdampfer bis zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde in 3ml Methanol (p.a.)
aufgenommen und nochmals zentrifugiert (10 min., 4000 g, 4 /C). Dieser Extrakt wurde für die
HPLC eingesetzt. Es wurden verschiedene Gradientenbedingungen mit unterschiedlichen Säulen
getestet
Die Vorbereitung und Untersuchung mit der HPLC wurde für jede Probe zweifach durchgeführt.
4.5.3.5 HPLC Bedingungen (2002, WZW)
Die Untersuchung der einzelnen Möhren- und Weizenproben erfolgte im Gradientenbetrieb.
Fliessmittel A= Ameisensäure (5%), B = Methanol 100% (Gradient Grade). Die Flussrate betrug
0,5 ml / min., das Probenvolumen betrug 10 µl, alle Injektionen wurden von Hand ausgeführt. Der
Injectionport wurde nach jeder Injektion mit Methanol gespült.
HPLC System : Beckman
Detektor: UV vis Detektor (Beckmann); Messungen bei 280 nm
Säulenmaterial: 1.Shandon Hypersil, 0,3 :m Innendurchmesser: 4mm, 250 mm
Software: Gynkosoft
2.Shandon Hypersil 0,3 :m, Innendurchmesser 4mm, 145 mm
Ganzheitliche Untersuchungsmethoden zur Erfassung und Prüfung der Qualität ökologischer Lebensmittel