肿瘤学2 - 国家自然科学基金委员会医学科学部

为 解 决 放 射 抗 拒 提 供 可 行 的 靶 点 。 本 研 究 以 人 喉 鳞 癌 细 胞 Hep-2 对 象 , 采 用 单 细 胞 克 隆 的方 法 , 建 立 了 系 列 具 有 放 射 敏 感 性 差 异 的 亚 细 胞 , 并 从 这 些 亚 细 胞 系 列 中 筛 选 出 最 具 有 原发 性 放 射 抗 拒 差 异 的 Hep-2max( 放 射 抗 拒 性 最 高 ) 和 Hep-2min( 放 射 抗 拒 性 最 低 ) 亚 细 胞 ,通 过 基 因 芯 片 筛 选 出 了 原 发 性 放 射 抗 拒 差 异 表 达 基 因 -PAGl( 鞘 糖 脂 微 结 构 域 1 相 关 磷 酸 化蛋 白 基 因 )。 进 一 步 采 用 RNA 干 扰 技 术 对 Hep-2max 细 胞 中 高 表 达 的 PAG1 基 因 进 行 封 闭 ,同 时 向 Hep-2min 细 胞 导 入 该 基 因 , 检 测 基 因 转 染 后 细 胞 放 射 抗 拒 性 的 改 变 , 证 明 干 扰PAG1 能 够 逆 转 放 射 抗 拒 亚 细 胞 Hep-2max 的 放 射 抗 拒 性 ; 同 时 外 源 性 PAG1 过 表 达 则 能 增 加放 射 敏 感 亚 细 胞 的 放 射 抗 拒 性 。 我 们 的 研 究 发 现 Hep-2 细 胞 原 发 性 放 射 抗 拒 的 关 键 分 子PAG1, 它 是 一 个 新 的 与 人 喉 鳞 癌 原 发 性 放 射 抗 拒 相 关 的 基 因 , 为 解 决 人 喉 鳞 癌 原 发 性 放 射抗 拒 提 供 了 可 靠 的 基 因 靶 点 和 实 验 依 据 。 本 研 究 结 果 证 实 了 人 喉 鳞 癌 细 胞 的 原 发 性 放 射 抗拒 是 不 同 于 辐 射 诱 导 后 获 得 性 放 射 抗 拒 的 分 子 事 件 。关 键 词 : 人 喉 鳞 癌 ; 鞘 糖 脂 微 结 构 域 1 相 关 磷 酸 化 蛋 白 基 因 ; 放 射 抗 拒 ; 细 胞 模 型学 科 代 码 :H1625发 表 论 著 : 无会 议 报 告 : 国 际 大 会 0 分 组 0 国 内 大 会 0 分 组 0培 养 人 才 : 博 士 后 0 博 士 0 硕 士 0鼻 咽 癌 中 p53 蛋 白 聚 集 的 分 子 机 制 研 究批 准 号 :30800419项 目 负 责 人 : 李 峰所 在 单 位 : 中 南 大 学超 过 一 半 的 癌 症 发 现 有 p53 突 变 , 而 鼻 咽 癌 中 p53 表 达 显 著 上 调 , 但 突 变 十 分 罕 见 。为 此 我 们 曾 采 用 RNAi 技 术 阻 断 鼻 咽 癌 细 胞 株 p53 蛋 白 的 内 源 性 表 达 , 采 用 串 联 亲 和 纯 化耦 联 质 谱 技 术 和 免 疫 共 沉 淀 耦 联 质 谱 等 靶 向 蛋 白 质 组 学 技 术 , 发 现 了 21 个 P53 相 互 作 用 蛋白 , 其 中 KRT5 是 一 个 重 要 的 相 互 作 用 蛋 白 质 。 进 一 步 用 免 疫 共 沉 淀 -Western blot 和 免 疫荧 光 双 标 记 观 察 等 方 法 验 证 KRT5 与 p53 蛋 白 之 间 的 相 互 作 用 。 用 Western blotting 和 免疫 组 织 化 学 检 测 KRT5 的 表 达 水 平 , 与 正 常 鼻 咽 粘 膜 细 胞 相 比 ,KRT5 在 NPC 中 表 达 明 显 下调 ,KRT 随 着 NPC 的 分 化 变 差 而 表 达 下 调 , 发 现 KRT5 的 表 达 水 平 与 NPC 的 临 床 分 期 、 组 织学 类 型 有 关 ,KRT5 低 表 达 的 NPC 组 织 表 现 更 晚 的 临 床 分 期 和 更 差 的 组 织 学 类 型 。 根 据 已 经建 立 的 CNE2/pSUPER 及 CNE2sip53 细 胞 , 分 析 了 二 维 凝 胶 电 泳 图 谱 及 与 鼻 咽 癌 中 的 p53 功能 相 关 蛋 白 质 。 这 些 蛋 白 质 可 能 与 鼻 咽 癌 细 胞 中 p53 蛋 白 功 能 失 活 的 分 子 机 理 有 关 , 为 鼻咽 癌 的 防 治 提 供 新 的 依 据 和 线 索 , 具 有 十 分 重 要 的 理 论 和 实 际 意 义 。关 键 词 : 鼻 咽 癌 ;p53 蛋 白 ; 蛋 白 质 相 互 作 用 ; 分 子 机 制-266-