Spunti di Nutrizione rev2011 - Clinica Pediatrica Trieste - Università ...

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5. La malattia celiaca Koskinen O, Collin P, Korponay-Szabo Ilma, Salmi T, Iltanen S, Haimila K, Partanen J, Mäki M, Kaukinen K. Gluten-dependent Small Bowel Mucosal Transglutaminase 2-specific IgA Deposits in Overt and Mild Enteropathy Coeliac Disease J Pediatr Gastroenterol Nutr 2008;47:436-442. 65 Vengono riportate immagini di immunofluorescenza (riquadri grandi) e corrispondenti immagini morfologiche dei villi intestinali (rettangoli piccoli), alla prima valutazione (A e B), dopo due anni di dieta contenente glutine (D e E) e dopo una dieta priva di glutine (E e F). A e B mostrano un quadro di celiachia “latente”: I villi sono normali (B) mentre si osservano dei depositi di IgA che co-localizzano con la transglutaminasi tessutale (A). Non si evince dall’immagine in bianco e nero, ma le frecce indicano il colore arancione derivante dalla fusione della fluorescenza gialla dovuta alla presenza di IgA e rossa dovuta alla presenza di transglutaminasi. D: due anni dopo la mucosa mostra segni di atrofia, sono sempre presenti anticorpi nella mucosa, ma non nel siero. Viene avviata la dieta senza glutine. F e E: a dieta senza glutine, la mucosa guarisce e scompaiono i depositi di anticorpi IgA anti-transglutaminasi. 102
103 5. La malattia celiaca Marzari R, Sblattero D, Florian F, et al. Molecular dissection of the tissue transglutaminase autoantibody response in celiac disease. J Immunol. 2001 Mar 15;166(6):4170-6. 66 Per prima cosa è utile ricordare che ciascun linfocito B mucosale presenterà nel proprio genoma dei riarrangiamenti che permettono la produzione di anticorpi funzionali con un elevato grado di diversità. Utilizzando dei primers che fiancheggiano le regioni variabili delle immunoglobuline, è possibile collezionare sotto forma di DNA copia (cDNA) tutto il patrimonio di diversità anticorpali codificate nell’intestino. Per eseguire l’analisi di questa enorme biblioteca, può essere sfruttata la tecnologia delle libraries fagiche. In pratica, questa tecnologia permette di associare a ciascuna sequenza di DNA codificante per una catena anticorpale la corrispondente proteina: per far ciò, il DNA viene trasferito all’interno di fagi in modo tale che la catena anticorpale venga espressa sul capside. In questo modo il fago fornisce un potente strumento di analisi e selezione: esso accoppia una proteina (esposta sulla superficie del fago ed utilizzabile per processi di selezione su base di affinità) al relativo DNA. Una volta identificata una catena anticorpale di interesse, questo sistema permette di amplificare ulteriormente il fago e di valutare agevolmente le caratteristiche molecolari dell’anticorpo, cioè con quali moduli di DNA questo è stato assemblato durante la ricombinazione genetica. Il limite di questa tecnologia è che non permette di effettuare l’accoppiamento giusto tra catene leggere e pesanti e quindi non riproduce con certezza l’anticorpo esattamente come è in vivo. D’altra parte, è noto che la catena pesante contribuisce per la maggior parte alla specificità antigenica, e quindi si ritiene che l’approssimazione delle librerie fagiche sia più che soddisfacente. Questo tipo di analisi ha permesso di caratterizzare la risposta autoanticorpale del soggetto celiaco, identificare le regione
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