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8 Biophysikalische / Biochemische Testungen zur DNA-Bindung 118
besondere Bedeutung zu. Bei einer Hemmung des Enzyms durch die Testverbin-
dung im zweiten Schritt des Assays bleibt die DNA in ihrem relaxierten Zustand. Dies
führt im Falle eines potentiellen, aber Topoisomerase I hemmenden, Interkalators zu
einem falschen Ergebnis. Die Methode zur Bestimmung der Topoisomerase I-En-
zymhemmung wird in Kapitel 8.1.3, Seite 120, beschrieben.
Abb. 8-3: Unwinding-Assay mit dem Interkalator Ellip-
ticin 152 ; Spur 1: scDNA; Spur 2: relaxierte DNA; Spur
3: 100 µM Ellipticin
In Abb. 8-4 sind die einzelnen Schritte des DNA-Unwinding Assays und den daraus
resultierenden Änderungen der Verwindungszahl L, der helicalen Windungszahl T
und der superhelicalen Windungszahl W zusammengefaßt.
Abb. 8-4: Schematisierter Ablauf des DNA-Unwinding-Assay
Tabelle 8-3, Seite 119, gibt einen Überblick über die möglichen Schlußfolgerungen
des DNA-Unwinding Assays nach der Entwicklung des Elektropherogramms.
152 Dissertation Marotto, A.; 62, Mainz, (2002)