La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

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4. Esame dopo concentrazione Per la concentrazione del campione di copros, indispensabile per i campioni contenenti poche cisti, si procede come descritto nelle procedure del campione di copros, considerando che il conservante più adatto per le Amebe è il PVA. 92 • Nell’osservazione del preparato tenere presente che molti leucociti o macrofagi possono assomigliare molto alle amebe, pertanto bisogna che la forma che si sta osservando al microscopio, oltre alla grandezza, misurata con l’oculare millimetrato, possegga tutti i requisiti caratteristici della morfologia dell’ ameba, cioè, come già riportato nella descrizione dei trofozoiti e delle cisti di ciascuna ameba, la morfologia e il numero dei nuclei, la morfologia del nucleolo, la distribuzione della cromatina nucleare e la presenza nel citoplasma dei corpi cromatofori e dei vacuoli contenenti eventualmente le emazie fagocitate, per essere sicuri della identificazione. • Nella refertazione dei campioni di copros, quindi, prima di scrivere la identificazione di una qualunque ameba, bisogna essere completamente sicuri di quello che si è visto al microscopio, con la considerazione che ogni campione è presumibilmente negativo salvo dimostrare il contrario. • Pertanto, se vi sono ancora, nel Parassitologo, dubbi circa la interpretazione dell’osservazione microscopica, si può ricorrere all’ausilio delle colorazioni permanenti. Colorazioni permanenti Le colorazioni che, più comunemente dopo la concentrazione, vengono impiegate per la ricerca delle amebe sono: • Colorazione tricromica • Colorazione ematossilina ferrica Utile per la sicura identificazione la cui procedura è illustrata dettagliatamente nel capitolo generalità.
LA COLORAZIONE TRICROMICA Interpretazione • Il citoplasma di cisti e trofozoiti appare blu-verde, con una pallida sfumatura. • La cromatina nucleare, i micro e macronuclei, gli eritrociti ingeriti ed i batteri appaiono di color rosso o rosso-porpora. • Il materiale ingerito, come muffe o lieviti, si colora di solito in verde; non sono rare, però, variazioni di tonalità. • Eventuali uova e larve di elminti si colorano in rosso. • Il materiale di fondo si colora in verde chiaro. Precisti di Entamoeba histolytica/dispar (Col. Tricromica) LA COLORAZIONE EMATOSSILINA FERRICA Interpretazione Trofozoite e cisti di Entamoeba histolytica/dispar (Col. Tricromica) La colorazione tipica ottenuta con Iron Hematoxylin Stain Set, con vetrini perfettamente fissati e colorati, è la seguente: • I citoplasma dei protozoi si colora in blu-grigio. Le inclusioni citoplasmatiche assumono un’intensa colorazione blu-nerastra. • I nuclei risultano blu-neri, in contrasto con la colorazione assunta dal citoplasma. • Le strutture intranucleari (cromatina, cariosomi) appaiono differenziate nei dettagli. • Il materiale di fondo si colora con gradazioni dal blu-grigio al nero. Precisti di Entamoeba histolytica/dispar (Col. Ematossilina ferrica) 93
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COLORAZIONE DI ZIEHL-NEELSEN MOD. L
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