La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

3. Immunofluorescenza diretta (IFD)
In commercio sono disponibili anticorpi monoclonali diretti agli antigeni di
Cryptosporidium.
La metodica utilizzata con l’impiego di questi monoclonali è descritta di seguito:
• Depositare 25µl. di una sospensione di copros sul pozzetto di un vetrino per IFI.
• Lasciar asciugare all’aria il preparato per 24 h.
• Fissare in acetone per 10’.
• Deporre 20µl. di anticorpo monoclonale sul pozzetto.
• Incubare in camera umida a 37°C per 30’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar asciugare.
• Deporre 20 µl. di coniugato legato ad isotiocianato di fluoresceina.
• Incubare in camera umida a 37°C per 30’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar asciugare.
• Depositare una goccia di glicerina tamponata sul pozzetto, coprire con coprioggetto.
Osservare con microscopio a fluorescenza l’intero preparato con obiettivo 40x.
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I protozoi eventualmente presenti appariranno di
color verde mela sul fondo nero-marrone.
Oocisti di Criptosporidium spp. in Immunoflorescenza 400x