La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

1. Carbolfuscina
Si pongono poche gocce di sospensione di copros su un vetrino portaoggetti e si
mescolano con una goccia di carbolfucsina; si lascia asciugare e si osserva al microscopio
con obiettivo 20x - 40x.
Le oocisti tondeggianti o ovoidali con inclusioni puntiformi o a virgola, appariranno
in negativo, perchè non assumono il colore, e spiccano sullo fondo colorato in rosso.
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Oocisti di Cryptosporidium spp. 400x (Col. carbolfucsina)
Si deve, comunque, considerare che la carbolfucsina non è un colorante molto specifico
ed inoltre che il preparato si altera con il passare del tempo: osservazioni microscopiche
del preparato, oltre i 15-20 minuti dalla preparazione, risulterebbe falsamente
negativo perchè il colorante col tempo penetra nella oocisti.
È indispensabile, pertanto, utilizzare una colorazione permanente come quella di
Ziehl-Neelsen mod. che risulta molto più specifica e facile da interpretare.
2. Ziehl-Neelsen modificato
La colorazione si fonda sul principio della acido-alcool resistenza; la parete delle oocisti
dei coccidi è molto resistente al trattamento sia con alcool che con acido, pertanto
una volta assunto il colorante primario, la carbolfucsina, sono resistenti al trattamento
con solventi organici forti come la miscela acido-alcool.
Per questa ragione i microrganismi che presentano tale caratteristica, come tutti i coccidi,
vengono chiamati acido-alcool resistenti.
La colorazione per l’acido-resistenza modificata da Kinyoun viene chiamata “metodo
a freddo” in quanto impiega un detergente tensioattivo che aggiunto alla carbolfucsina
facilita la colorazione primaria, senza dover ricorrere al riscaldamento del
preparato.